综合图区亚洲网友自拍|亚洲黄色网络|成人无码网WWW在线观看,日本高清视频色视频kk266,激情综合五月天,欧美一区日韩一区中文字幕页

                                                              English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個(gè)人登錄 | 郵件訂閱
                                                              當(dāng)前位置 > 首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 高親和力單克隆抗體制備問(wèn)題及對(duì)策

                                                              高親和力單克隆抗體制備問(wèn)題及對(duì)策

                                                              瀏覽次數(shù):1762 發(fā)布日期:2014-1-2  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

                                                              一、單抗制備-骨髓瘤細(xì)胞SP2/0 培養(yǎng)過(guò)程中遇到的問(wèn)題及對(duì)策

                                                              1,細(xì)胞長(zhǎng)的慢或細(xì)胞死亡
                                                              正常生長(zhǎng)情況下,細(xì)胞一天傳代一次,生長(zhǎng)越好,貼壁越多
                                                              對(duì)策:①培養(yǎng)基配方不對(duì);② 接種密度太低,低于10的4次方;③污染了支原體或者其他不明細(xì)菌,支原體的現(xiàn)狀是出現(xiàn)小黑點(diǎn);細(xì)菌污染是渾濁;霉菌污染是出現(xiàn)白色肉眼可見菌落;不明細(xì)菌污染出現(xiàn)砂狀平鋪背景,視野發(fā)暗。④細(xì)胞瓶刷洗不干凈

                                                              2,細(xì)胞形態(tài)異常
                                                              正常生長(zhǎng)情況下,細(xì)胞渾圓,透亮,成對(duì)數(shù)生長(zhǎng),生長(zhǎng)越好,貼壁多,懸浮少
                                                              對(duì)策:①培養(yǎng)基配方不對(duì);② 接種密度太低,低于10的4次方;③污染了支原體或者其他不明細(xì)菌,支原體的現(xiàn)狀是出現(xiàn)小黑點(diǎn);細(xì)菌污染是渾濁;霉菌污染是出現(xiàn)白色肉眼可見菌落;不明細(xì)菌污染出現(xiàn)砂狀平鋪背景,視野發(fā)暗。④細(xì)胞瓶刷洗不干凈


                                                              單抗制備-細(xì)胞融合篩選過(guò)程中遇到的問(wèn)題及對(duì)策

                                                              1,融合率低,陽(yáng)性孔少
                                                              ①免疫的問(wèn)題。由于免疫原性不強(qiáng)或者免疫途徑不當(dāng)造成免疫弱,效價(jià)低。
                                                              ②融合過(guò)程中溫度、時(shí)間、PEG分子量,作用時(shí)間等。
                                                              ③脾細(xì)胞是否取出了足夠多的細(xì)胞,有無(wú)組織碎片干擾。
                                                              ④融合前骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)是否完好,細(xì)胞是否渾圓,透亮,成對(duì)數(shù)生長(zhǎng)。


                                                              2,單抗親和力整體低
                                                              ①免疫的問(wèn)題。免疫途徑不當(dāng)或者免疫原問(wèn)題。
                                                              ②融合細(xì)胞篩選過(guò)程出現(xiàn)遺漏,篩選方法不當(dāng)或檢測(cè)方法不當(dāng),造成沒(méi)有篩到高親和力的融合細(xì)胞。
                                                              ③由于亞克隆細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境不合適,導(dǎo)致融合細(xì)胞染色體丟失,分泌特性改變,親和力從高變低,這時(shí)就需要及時(shí)更換培養(yǎng)液,當(dāng)細(xì)胞增長(zhǎng)到一定密度的時(shí)候,培養(yǎng)基就開始變顏色,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),造成染色體丟失;控制好細(xì)胞的密度,密度過(guò)大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),造成染色體丟失;不要過(guò)于頻繁操作細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度不是很大的時(shí)候,不要頻繁操作,否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長(zhǎng)形態(tài)發(fā)生明顯變化。
                                                              操作細(xì)致,防止細(xì)胞被支原體等微生物污染。

                                                              3,抗體親和力從高變低
                                                              ①?zèng)]有及時(shí)更換培養(yǎng)液,當(dāng)細(xì)胞增長(zhǎng)到一定密度的時(shí)候,培養(yǎng)基就開始變顏色,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),造成染色體丟失或者性狀改變。
                                                              ②控制好細(xì)胞的密度,密度過(guò)大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),造成染色體丟失或者性狀改變。
                                                              ③過(guò)于頻繁操作細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度不是很大的時(shí)候,不要頻繁操作,否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長(zhǎng)形態(tài)發(fā)生明顯變化。
                                                              ④細(xì)胞被支原體等微生物污染。
                                                              ⑤亞克隆次數(shù)超過(guò)5次,導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境經(jīng)常被改變,弱的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞染色體丟失或者性狀改變。

                                                              三、單抗腹水制備過(guò)程中遇到的問(wèn)題及對(duì)策
                                                              1,腹水少或者無(wú)腹水產(chǎn)生
                                                              ①致敏不正確,不正確的使用致敏劑,或者致敏時(shí)間與接種雜交瘤的時(shí)間相差太久,一般是7-14天,具體看小鼠的腹部情況。

                                                              ②雜交瘤細(xì)胞或者致敏劑的接種位置不正確,沒(méi)有打到腹腔,而是打到了皮下。

                                                              ③接種的雜交瘤細(xì)胞數(shù)量太少,太多或者細(xì)胞狀態(tài)不好。一般不50萬(wàn)個(gè)細(xì)胞左右為宜。

                                                              ④建議使用母鼠或者生育過(guò)的母鼠制備腹水。 
                                                              2,腹水沒(méi)有效價(jià)

                                                              ①制備腹水的雜交瘤極不穩(wěn)定,打到小鼠身上之前就失去抗體分泌能力或者打到腹腔內(nèi)就失去了分泌能力。

                                                              ② 致敏小鼠時(shí)采用了錯(cuò)誤的致敏劑。
                                                               ③接種的雜交瘤細(xì)胞數(shù)量太少,或者細(xì)胞狀態(tài)不好。
                                                              ④ 由于注射方式和部位錯(cuò)誤,形成了實(shí)體瘤。

                                                              來(lái)源:山東藍(lán)都生物科技有限公司
                                                              聯(lián)系電話:18266598399
                                                              E-mail:[email protected]

                                                              標(biāo)簽: 單克隆抗體制備
                                                              用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊(cè) 忘記密碼
                                                              評(píng)論只代表網(wǎng)友觀點(diǎn),不代表本站觀點(diǎn)。 請(qǐng)輸入驗(yàn)證碼: 8795
                                                              Copyright(C) 1998-2024 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:[email protected]