《中國藥典》對部分中藥材中AFB1的限量規(guī)定為5µg/kg,黃曲霉毒素總限量為10µg/kg。
目前來講,黃曲霉毒素AFT的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC),酶聯(lián)免疫檢測法等。液相色譜法可以精確的檢測中藥材中黃曲霉毒素的微小含量。而使用黃曲霉毒素 ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中黃曲霉毒素殘留。
泰樂祺科技作為國內(nèi)專業(yè)從事霉菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)的供應(yīng)商,泰樂祺檢測應(yīng)用實驗室重點關(guān)注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等問題,針對上述情況,提出了以下解決方案。
免疫親和柱+KRC光化學(xué)柱后衍生法
1. 簡介
PriboFast黃曲霉毒素B+G免疫親和柱(編號IAC-010-3)可選擇性吸附樣品液中的毒素,從而對毒素樣品起到非常針對性的純化作用,然后用HPLC/FLD+KRC柱后衍生系統(tǒng)可以有效的測定黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、濃度,提高檢測的準確性和靈敏度。
2. 免疫親和柱/KRC衍生法特點:
• 采用高特異性的抗體。
• 柱容量高、柱體積大,穩(wěn)定的純化效率;
• 柱內(nèi)膠含量高,保證穩(wěn)定的回收率;
• 符合國內(nèi)外限量標準
• 純化后直接用于ELISA 法,高效液相色譜法,熒光光度法等。
• 適用于各種復(fù)雜基質(zhì)樣品處理
• 衍生化操作方便,光化學(xué)衍生化無需使用衍生試劑(通常電化學(xué)柱后衍生均需要使用衍生試劑,分析成本高,操作麻煩,儀器故障率較高)。
• 回收率高,達到90%以上
3. 免疫親和柱法操作步驟簡介:
1)樣品處理
•準確稱取25g粉狀樣品,溶于125ml甲醇/水(70/30)中;
.加入5.0g氯化鈉以均質(zhì)器高速攪拌,提取2分鐘;
.4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾;
.取15mL濾液并加入30mL水稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾;
.取稀釋后液體待測;
.將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準確移取15.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;
.將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;
.以10.0mL水淋洗柱子2次,棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;
.準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。
•2)測定:HPLC直接進樣,經(jīng)黃曲霉毒素專用色譜柱、KRC光化學(xué)柱后衍生化后熒光檢測器直接記錄并計算出黃曲霉毒素B1B2G1G2濃度;
Pribofast KRC 柱后衍生器和 HPLC參數(shù)(符合GB23212-2008)
PriboFast KRC-25 柱后光化學(xué)衍生器 紫外燈波長:254 nm
HPLC-色譜柱 :黃曲霉毒素專用色譜柱 150 x 4.6 mm; C-18
流 動 相 :甲醇-水 45:55
流 量 : 1.0 mL/min
柱 溫 : 35 °C
進 樣 體 積 : 20μL
熒光檢測器 : λ-激發(fā)波長:365nm λ-發(fā)射波長:455 nm
液相色譜儀檢測配置;
高效液相色譜儀帶有熒光檢測器;
Pribofast KRC-25 柱后光化學(xué)衍生裝置,配有納米燈管254nm,25米FTFE線圈。
黃曲霉毒素專用色譜柱 C18 150 x 4.6 mm