前情回顧：食品真菌毒素檢測的那些事

       

       Elisa生物檢測是一種敏感度高，同時特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)檢測方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

 

       目前市面上的Elisa試劑盒檢測原理主要有以下四種：直接法，間接法，夾心法，競爭法。

 

 

       四種Elisa檢測方法由于其檢測原理各有優(yōu)劣：

 

	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)
直接法	1.操作簡便 2.消除了二抗交叉反應(yīng)	1.一抗由于添加標(biāo)簽免疫活性降低 2.標(biāo)記一抗耗時且昂貴 3.沒有產(chǎn)生信號放大
間接法	1. 一抗的最大免疫反應(yīng)性得以保留 2. 高靈敏度，信號放大	1. 二級抗體可能發(fā)生交叉反應(yīng)，產(chǎn)生非特異性信號 2. 需要額外的孵育步驟
夾心法	1.特異性，靈敏度高 2.適合復(fù)雜的樣本	1.檢測時間，反應(yīng)時間增加 2.步驟繁瑣
競爭法	1. 通過觀察預(yù)期信號輸出中的干擾來測量樣本中抗原（或抗體）的濃度。 2. 最常用于分析物較小，不能同時跟兩種不同的抗體結(jié)合。	1.計算不太直觀 2.總體敏感性和特異性較低。

 

       通常我們在購買我們所需要的Elisa試劑盒時主要會從以下幾個方面進(jìn)行選擇：

 

       Elisa試劑盒選擇原則：

 

指標(biāo)	選項(xiàng)
樣本類型	人，小鼠，大鼠
檢測指標(biāo)的類別	•多表位的大蛋白：夾心ELISA •小分子：競爭ELISA
檢測需求	定性或定量
靈敏度	低濃度的物質(zhì)需選擇高靈敏度檢測方式
樣本體積	珍貴的樣本用少量的體積
回收率和線性	•靈敏度 •動態(tài)范圍 •標(biāo)準(zhǔn)曲線
檢測系統(tǒng)	比色法，熒光法，發(fā)光法
其他優(yōu)勢	協(xié)議簡單，操作方便，實(shí)驗(yàn)時間短

 

       我們購買的Elisa試劑盒質(zhì)量到底怎樣？檢測結(jié)果的可信度高不高？

 

       Elisa試劑盒評價標(biāo)準(zhǔn)：

 

       ① 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，應(yīng)大于等于0.9900。

 

       ② 靈敏度：反應(yīng)試劑盒的最低檢測濃度

 

       ③ 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

 

       ④ 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)

 

       ⑤ 回收率：判斷實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和特異性

 

       Elisa試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線：

 

       標(biāo)曲R值是幾個9才合格？

 

       實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按檢測標(biāo)準(zhǔn)（方法）的要求使用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。所用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)覆蓋被測樣品的濃度范圍。檢測標(biāo)準(zhǔn)（方法）如無具體的要求，至少使用5個標(biāo)樣（除空白外）建立線性標(biāo)準(zhǔn)曲線，每個點(diǎn)重復(fù)測定1-3次，對于篩選方法，線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.98，對于確證方法，相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。

 

       其實(shí)，大于0.99是判斷是否為線性相關(guān)的一個標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)際應(yīng)用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監(jiān)測結(jié)果只用接近最高濃度一半（中間濃度）的位置才比較準(zhǔn)確，如果線性大于0.999的話，在整個線性范圍內(nèi)都會有一個比較滿意的結(jié)果。

 

       如果檢測的線性不好，可以減少標(biāo)準(zhǔn)的覆蓋范圍，將標(biāo)準(zhǔn)的濃度調(diào)整到待測樣品濃度附近，這樣結(jié)果也是非常準(zhǔn)確的。例如，樣品的濃度約20ppb,但在0~50ppb范圍建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，但線性非常不理想，這時可以將標(biāo)準(zhǔn)范圍調(diào)整到15~25ppb之間，作五個標(biāo)準(zhǔn)。

 

       在這里，我們給大家?guī)�來美國著名的生物檢測工具供應(yīng)商Biovision開發(fā)了一系列的我們準(zhǔn)確性高，靈敏度高，特異性好，重復(fù)性好，可以檢測檢測各類食品，飼料，組織及生物液體中真菌毒素、抗生素、食品添加劑以及其他細(xì)菌蛋白的ELISA試劑盒：

       1.抗生素類：

 

       檢測食品中抗生素的殘留

       樣本類型：組織、血清、牛奶、雞蛋和其他生物樣本

 

指標(biāo)	貨號	靈敏度	樣本
氨芐青霉素	E4350	2.5 ng/ml	血清，尿液，牛奶，組織
氯霉素	K4230	0.025 ng/ml	組織，牛奶，蜂蜜，記蛋
慶大霉素（血清/尿液）	K4315	0.3 ng/ml	血清，尿液，牛奶，組織
慶大霉素	K4206	0.3 ng/ml	牛奶，組織
異煙肼	K4765	0.1μg/ml	血清
卡那霉素	K4210	0.5 ng/ml	組織，牛奶，奶粉
喹諾酮	E4530	0.12 ng/ml	血清，尿液，牛奶
鏈霉素	E4272	0.1 ng/ml	組織，蜂蜜，牛奶，奶粉
四環(huán)素	E4273	0.05 ng/ml	組織，蜂蜜，雞蛋
萬古霉素	E4605	12.8 ng/ml	血清，尿液

 

 

以 慶大霉素 (serum/urine) ELISA Kit（K4315）為例

 

       2.真菌毒素：

 

       真菌毒素是真菌產(chǎn)生的低分子量次級代謝產(chǎn)物

       樣品類型：玉米、谷物、花生、大米、大豆等。

 

指標(biāo)	貨號	靈敏度	樣本
赭曲霉毒素A（OTA）	E4746	0.1 ppb	飼料、谷物
總黃曲霉毒素	E4747	0.02 ppb	酒、醬油、醋、谷物、花生、 配方飼料、食用油
T-2毒素	E4748	0.05 ppb	玉米、大米、豆類、花生、燕麥、飼料
伏馬菌素B1	E4749	0.5 ppb	谷物、花生、飼料
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇	E4750	3 ppb	大米、小米、面粉和其他作物/飼料
黃曲霉毒素M1	E4566	0.02 ppb	牛奶、奶粉
黃曲霉毒素B1（AFB1）	K4208	0.05 ppb	食用油、大米、花生、玉米
玉米赤霉烯酮（ZEN）	E4276	0.3 ppb	谷類及復(fù)合飼料

       3.食品添加劑：

 

       食品受到生物和環(huán)境污染物的污染發(fā)生在生產(chǎn)和加工的幾個階段

       樣品類型：牛奶、肉類、玉米、谷物、花生、大米、大豆，等。

 

指標(biāo)	貨號	靈敏度	樣本
沙丁胺醇	K4209	0.1 ppb	豬尿、組織、飼料
磺胺單甲氧嘧啶	E4774	0.05 ppb	組織、血清、尿液、蜂蜜、牛奶
磺胺甲氧基二嗪	E4775	0.5 ppb	組織，血清，尿液，蜂蜜，牛奶
呋喃妥因（AHD）	E4275	0.05 ppb	奶粉，牛奶，紙巾，雞蛋，肝臟，蜂蜜，魚，蝦
磺胺喹惡啉	E4773	0.05 ppb	組織，血清，尿液，蜂蜜，牛奶，飼料

       4.宿主細(xì)胞蛋白：

 

       表達(dá)蛋白經(jīng)過幾個純化步驟后，宿主細(xì)胞蛋白仍然可以以較高濃度存在，甚至?xí)�與原料藥一起純化和濃縮

 

       樣品類型：細(xì)胞裂解液、其他生物液

 

 

 

QuickDetectTM BSA ELISA Kit（E4466）

       5.其他毒素：

       雙酚A和三聚氰胺

指標(biāo)	貨號	檢測范圍	樣本
雙酚A（BPA）	E4722	0.4-30 ppb	細(xì)胞裂解液，其他生物液體
三聚氰胺	E4274	2-162 ppb	奶粉、牛奶、紙巾、飼料、雞蛋、血清

 

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