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黃曲霉毒素及其檢測方法綜合介紹

瀏覽次數(shù)：5464　發(fā)布日期：2015-2-10　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

一、黃曲霉毒素介紹

黃曲霉毒素(aflatoxin，簡稱為 AF)是到目前為止所發(fā)現(xiàn)的毒性最大的真菌毒素。它可通過多種途徑污染食品和飼料，直接或間接進(jìn)入人類食物鏈，威脅人類健康和生命安全，對(duì)人體及動(dòng)物內(nèi)臟器官尤其是肝臟損害嚴(yán)重，該毒素是黃曲霉和寄生曲霉中產(chǎn)毒菌株的代謝產(chǎn)物，普遍存在于霉變的糧食及糧食制品中。黃曲霉毒素十分耐熱，加熱至 230℃才能被完全破壞，因此一般烹飪加工也不易消除。

二、黃曲霉毒素對(duì)人體的危害

1、引起急、慢性中毒：

黃曲霉毒素是劇毒物質(zhì)，其毒性相當(dāng)于氰化鉀的 10 倍，砒霜的 68 倍。黃曲霉毒素屬肝臟毒，除抑制 DNA、RNA的合成外，也抑制肝臟蛋白質(zhì)的合成，黃曲霉毒索引起人類的急性中毒事件，國內(nèi)外均有許多報(bào)導(dǎo)，最典型的是印度的霉變玉米事件，該事件直接導(dǎo)致了數(shù)十人喪生，數(shù)百人患上不同類型的肝臟疾病。

2、致癌性：

黃曲霉毒素有極強(qiáng)的致癌性，長期攝入黃曲霉毒素會(huì)誘發(fā)肝癌。它誘發(fā)肝癌的能力比二甲基亞硝胺大 75 倍，是目前公認(rèn)的致癌性最強(qiáng)的物質(zhì)之一。另據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)導(dǎo)，黃曲霉毒素含量在30—50ug/kg 時(shí)為低毒，50—100ug/kg 時(shí)為中毒，100—1000ug/kg 時(shí)為高毒，1000ug/kg 以上為極毒。鑒于黃曲霉毒素對(duì)人類的巨大危害性，我國對(duì)其在食品中的含量作了嚴(yán)格規(guī)定，其中，乳制品中黃曲霉毒素最高允許量為 5ug/kg（即 5ppb）。

三、黃曲霉毒素的種類

黃曲霉毒素主要有 4 種：即B1、B2、C1、G2，其中B1 被認(rèn)為是主要的有毒物質(zhì)，有 2 種這些毒素的代謝產(chǎn)物M1 和M2。其中黃曲霉毒素B1 主要存在于農(nóng)產(chǎn)品，動(dòng)物飼料，中藥等產(chǎn)品中；黃曲霉毒素M1是動(dòng)物攝入黃曲霉毒素B1后在體內(nèi)經(jīng)羥基化代謝的產(chǎn)物，一部分從尿和乳汁排出，一部分存在于動(dòng)物的可食部分，如乳、肝、蛋類、腎、血和肌肉中，其中以乳最為常見。黃曲霉毒素M1的毒性和致癌性與黃曲霉毒素B1的基本相似。由于牛乳及其制品是人類、特別是嬰兒的主要食品，所以其危害性更大。

四、最新政策及國標(biāo)（含國外一些政策）

1、自 2003 年8月 1 日起，凡在我國境內(nèi)從事米、面、油、醬油、醋生產(chǎn)加工的企業(yè)，其產(chǎn)品須經(jīng)檢驗(yàn)合格后方可上市。國家質(zhì)檢總局發(fā)布的《關(guān)于印發(fā)小麥粉等 5 類食品生產(chǎn)許可證實(shí)施細(xì)則的通知》中明確規(guī)定，黃曲霉毒素 B1 必須檢測。

2、在第八期《中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局公報(bào)》中發(fā)布關(guān)于黃曲霉毒素檢測方法的最新國標(biāo)：

（1）、GB/T 18979-2003 《食品中黃曲霉毒素的測定——免疫親和層凈化高效液相色譜法和熒光光度法》

（2）、GB/T 18980-2003 《乳和乳粉中黃曲霉毒素 M1 的測定——免疫親和層凈化高效液相色譜法和熒光光度法》

以上兩項(xiàng)國標(biāo)均在 2003年 8 月1 日開始實(shí)施

3、2002 年 2 月 4 日歐盟決議對(duì)從中國進(jìn)口或委托從中國進(jìn)口的花生和花生制品實(shí)施黃曲霉毒素強(qiáng)制性檢測的特殊條件

五、中國及國際上對(duì)黃曲霉毒素的檢測標(biāo)準(zhǔn)

1、主要國家：

品名	中國標(biāo)準(zhǔn)	美國標(biāo)準(zhǔn)	歐盟
玉米、花生、花生油，堅(jiān)果和干果（核桃、杏仁）	≤20μg/kg	≤20μg/kg	≤2、4、5、8、10、15μg/kg
玉米及花生仁制品（按原料折算	≤20μg/kg	≤20μg/kg	≤2、4、5、8、 10、15μg/kg
大米、其它食用油（香油、菜子油、大豆油、葵花油、胡麻油、茶油、麻油、玉米胚芽油、米糠油、棉籽油）	≤10 μg/kg	≤10μg/kg	≤ 2 、4 μg/kg
其它糧食（麥類、面粉、薯干）、發(fā)酵食品（醬油、食用醋、豆豉、腐乳制品）、淀粉類制品（糕點(diǎn)、餅干、面包、裱花蛋糕）	≤ 5 μg/kg (ppb)	≤10μg/kg (ppb)	不得檢出
牛乳及其制品（消毒牛乳、新鮮生牛乳、全脂牛奶粉、淡煉乳、甜煉乳、奶油）、黃油、新鮮豬組織（肝、腎、血、瘦肉）	≤0.5μg/kg (ppb)	≤0.5μg/kg (ppb)	≤0.05μg/kg (ppb)

2、其他

(1)、WHO／FAO 標(biāo)準(zhǔn)。國際衛(wèi)生組織(WHO)／世界糧農(nóng)組織所屬的食品法典委員會(huì)(CAC)推薦食品、飼料中黃曲霉毒素最大允許量標(biāo)準(zhǔn)為總量(B1+B2+G1+G2)小于15μg／kg；牛奶中M1 的最大允許量為 0．5μg／kg

(2)、南非標(biāo)準(zhǔn)。1990 頒布了黃曲霉毒素的最大允許標(biāo)準(zhǔn)：食品中黃曲霉毒素總量小于 10μg／kg，其中黃曲霉毒素 B1 小于5μg／kg。

(3)、其他標(biāo)準(zhǔn)。印度標(biāo)準(zhǔn)是花生中黃曲霉毒素 B1 小于 30μg／kg；越南和阿根廷的標(biāo)準(zhǔn)為黃曲霉毒素 B1 小于20μg／kg。

六、黃曲霉毒素檢測方法

測定黃曲霉毒素M1的方法有薄層色譜法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附測定法、質(zhì)譜法、放射免疫測定法。這些方法或多或少都具有如下不足之處：

（1）、在操作過程中，需要使用劇毒的黃曲霉毒素M1作為標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物，對(duì)操作人員造成巨大的沾污危險(xiǎn)，而且黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)購買十分困難。

（2）、操作過程煩瑣、復(fù)雜、時(shí)間長，勞動(dòng)強(qiáng)度大。

（3）、儀器設(shè)備昂貴、笨重、操作復(fù)雜，難以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場快速分析。

（4）、靈敏度較差，重復(fù)性很難得到滿意結(jié)果。

在上面第四項(xiàng)中提到的最新國標(biāo)方法“免疫親和柱法”較好的解決了上面的不足，該種方法可以采用配套的熒光儀進(jìn)行檢測，也可以和高效液相色譜法結(jié)合，解決標(biāo)準(zhǔn)物污染和操作過程繁復(fù)等問題。同時(shí)該種方法有著較好的權(quán)威性和通用性，且為國外多個(gè)組織認(rèn)可，被列為標(biāo)準(zhǔn)方法，如：

美國公職分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）

美國農(nóng)業(yè)部聯(lián)邦谷物檢測中心（FGIS）

國際純粹與應(yīng)用化學(xué)協(xié)會(huì)（IUPAC）

美國食品藥品行政署（US-FDA）

美國農(nóng)業(yè)部（USDA）

同時(shí)在國內(nèi)被認(rèn)證的機(jī)構(gòu)：

中國出入境檢驗(yàn)檢疫局（CIQ）

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)（GB）

七、黃曲霉毒素檢測——“免疫親和柱法”方法簡介

為了開發(fā)一種簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確的分析方法,美國 VICAM(維康)公司與哈佛大學(xué)、麻省理工學(xué)院、約翰－霍普金斯大學(xué)、AOAC、FDA、FGIS、美國農(nóng)業(yè)部等著名大學(xué)和政府機(jī)構(gòu)通力合作，發(fā)明研制了一系列以單克隆免疫親和柱為分離手段，用熒光計(jì)、紫外燈作為檢測工具的分析方法。

該項(xiàng)技術(shù)有一下特點(diǎn)：

1、認(rèn)證機(jī)構(gòu)廣泛，通用性強(qiáng)（見第六項(xiàng)）

2、分析速度快，一個(gè)樣品只需 10－15分鐘，其他傳統(tǒng)的方法要做到定量分析需要幾小時(shí)至幾天的時(shí)間。

3、靈敏度高，測定范圍廣泛（0－300ppb）,用熒光計(jì)可以測定 0.1ppb 的黃曲霉毒素 M1，用 HPLC可以檢測出 10ppt 的黃曲霉毒素 M1。

4、采用單克隆免疫技術(shù)，可以特效性地將黃曲霉毒素和其他真菌毒素分離出來，分離效率和回收率高，正確性和可靠性強(qiáng)。

5、儀器輕便容易攜帶，自動(dòng)化程度高，操作簡單，直接讀出測試結(jié)果，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員要求不高，可以在小型實(shí)驗(yàn)場所使用。

6、不需要?jiǎng)《镜狞S曲霉毒素和其他真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)物來標(biāo)定，所以在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，絕對(duì)安全可靠。目前，美國花生農(nóng)場主、加工廠、官方檢測機(jī)構(gòu) 90%以上均采用維康技術(shù)分析黃曲霉毒素，維康技術(shù)在全世界 110 個(gè)國家和地區(qū)得到了廣泛的應(yīng)用。

在中國的典型用戶有：檢驗(yàn)檢疫系統(tǒng)（山東、威海、日照、臨沂、石島、濰坊、天津、塘沽、河南、遼寧、大窯灣、錦州、唐山、北京、汕頭、安徽、上海、廈門、平?jīng)觥股�、湖北、廣州、珠海），CDC（北京、上海）、質(zhì)檢系統(tǒng)（上海、山西、濰坊、淄博、西安、哈爾濱），國家飼料檢測中心（北京）、國家糧油檢測中心（北京）、成都糧科所、天津農(nóng)科院、農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品檢測中心（新疆）、上海獸醫(yī)站、李錦記（廣東）、遼寧糧油外貿(mào)、山東華盛、東海糧油、安徽弘安、長生植物油、宏大油脂、文登糧油、文登昆俞、日照東方、日照東盛、日照中谷糧油、日照糧油、日照東粵、日照亞泰、五蓮糧油、興安糧油、莒縣山孚、莒縣糧食局、日照海納、日照盛康、莒縣春園、煙臺(tái)平孚、煙臺(tái)楓林、煙臺(tái)金陵、水道糧管所、煙臺(tái)大成、煙臺(tái)大江、煙臺(tái)新瑞、煙臺(tái)天府、煙臺(tái)澳華、招遠(yuǎn)糧油、萊陽魯花、榮成副食品、中孚糧油、威海正昌、宏昆食品、威海華隆、威海黃海、潤德糧油、青島佳安、青島佳德、青島佳景、青島東方、青島興華、青島金華、青島銳盛、青島盛德、萊西花生、萊西松旺、膠州恒升、

膠州供銷、臨沂裕隆、莒南花生協(xié)會(huì)、莒南優(yōu)盛、莒南正大、莒南四海、沂水寶盛、臨沂天望、臨沂綠地、臨沂中盛、諸城糧油、諸城供銷、安丘外貿(mào)、唐山南光、唐山天申、廊坊普瑞納、鎮(zhèn)江嘉吉、嘉興嘉吉、上海味好美、同仁堂等，（煙臺(tái)、濟(jì)南、廣東、寧波、吉林、山西、黑龍江、河北、江蘇、淮安、福建和甘肅檢驗(yàn)檢疫局、SFDA、上海藥檢、深圳南山 CDC、廣東 CDC、上海 SGS、醫(yī)科院藥植所、天津雀巢、商檢所、浙大飼料所、大連質(zhì)檢、遼寧質(zhì)檢、臨沂質(zhì)檢、日照質(zhì)檢、青島通標(biāo)、青島嘉里、河南農(nóng)科院、湖北綠色產(chǎn)品檢測中心使用的是親和柱+HPLC法）。

可以檢測的樣品包括：大米、面粉、醬油、植物油、醋、牛奶、奶制品、花生、花生醬、花生油、核桃、胡桃、杏仁、咖啡、玉米、蜂蜜、谷物、高粱、大豆、醬、蔬菜、胡椒、辣椒、中藥材、煙草、啤酒、小麥、棉籽、燕麥、飼料等。

八、可以測試的其他真菌毒素

該種方法適用廣泛，利用同一臺(tái)儀器和相似的分析方法還可檢測出赭曲霉毒素，伏馬毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、T-2 毒素及橘青霉毒素等。

快速、準(zhǔn)確的檢測食品中的真菌毒素

黃曲霉毒素免疫親和柱分析法(IAC-AFLATEST)是美國維康(Vicam)公司的專利技術(shù),1994 年被AOAC(美國公職分析化學(xué)家協(xié)會(huì)) 批準(zhǔn)為最新的官方方法(編號(hào)為：991.31)，同時(shí)，它也是美國農(nóng)業(yè)部聯(lián)邦谷物檢測中心(證書編號(hào)為：FGIS91-103-13),IUPAC(國際純粹與應(yīng)用化學(xué)協(xié)會(huì))US-FDA(美國食品藥品行政署)和 USDA(美國農(nóng)業(yè)部)認(rèn)證的官方方法.經(jīng)山東商檢局科技工作者的努力,黃曲霉毒素免疫親和柱分析法(IAC-AFLATEST)已經(jīng)被制定為中國出入境檢驗(yàn)檢疫局(CIQ)新的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

以前，黃曲霉毒素分析一般采用薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)和酶聯(lián)吸附免疫法(ELISA)。TLC 雖然簡便，但靈敏度差；HPLC 雖然靈敏度高，但樣品處理煩瑣，操作復(fù)雜，儀器昂貴.ELISA 重復(fù)性差試劑壽命短需要低溫保存。此外，這些方法都有共同的不足之處：

（1）在操作過程中，需要使用劇毒的真菌毒素作為標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物，有對(duì)操作人員造成巨大沾污的危險(xiǎn)。

（2）在對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理過程中，需要使用多種有毒、異味的有機(jī)溶劑，不僅毒害操作人員，而且污染環(huán)境。

（3）操作過程煩瑣、時(shí)間長，勞動(dòng)強(qiáng)度大。

（4）儀器設(shè)備復(fù)雜、笨重，難以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場快速分析。

（5）靈敏度較差，無法滿足歐盟等國的標(biāo)準(zhǔn)要求。

為了開發(fā)一種簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確的分析方法,美國維康(Vicam)公司與哈佛大學(xué)、麻省理工、約瀚-霍普金斯大學(xué)、AOACFDA、FGIS、美國農(nóng)業(yè)部等著名大學(xué)和政府機(jī)構(gòu)通力合作，研制發(fā)明了一系列的以單克隆免疫親合柱為分離手段,用熒光計(jì),紫外燈作為檢測工具的分析方法.維康技術(shù)具有如下特點(diǎn):

1) 是 AOAC(美國職業(yè)分析家協(xié)會(huì))、IUPAC(國際純粹與應(yīng)用化學(xué)協(xié)會(huì))、USDA-FGIS(美國農(nóng)業(yè)部聯(lián)邦物谷檢測中心)、USDA-GIPSA(美國農(nóng)業(yè)部谷物檢測、包裝、貯存行政署)認(rèn)證的官方方法，其檢測結(jié)果在世界各地均能得以認(rèn)可。

2) 分析速度快，一個(gè)樣品只需 10-15 分鐘，而其它傳統(tǒng)方法均需要幾個(gè)小時(shí)至幾天時(shí)間。

3) 靈敏度高，測定范圍寬(0.1-300ppb)，用 HPLC 檢測可以測定 10ppt 的黃曲霉毒素 M1。

4) 采用單克隆抗體免疫技術(shù),可以特效性地將黃曲霉毒素或其它真菌毒素分離出來,分離效率和回收率高,正確性和可靠性強(qiáng)。

5) 儀器設(shè)備輕便容易攜帶,自動(dòng)化程度高,操作簡單,直接讀出測試結(jié)果,高中文化水平者即可勝任,可以在小型實(shí)驗(yàn)室或現(xiàn)場使用

6) 不需要?jiǎng)《镜狞S曲霉毒素及其它真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)物來標(biāo)定,所以整個(gè)試驗(yàn)操作過程中,絕對(duì)安全可靠。

7) 利用同一臺(tái)儀器和相似的分析方法，還可以檢測赭曲毒素、伏馬毒素、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON 或稱嘔吐毒素）、T-2 毒素和橘青霉毒素。

序號(hào) 描述定貨號(hào) 序號(hào) 描述定貨號(hào)

1 4系列熒光計(jì) G8000 13 甲醇分配器 20501

2 槽紋濾紙 31240 14 打印紙 G8100

3 一次性塑料漏斗 36020 15 一次性塑料移液器 20652

4 一次性塑料燒杯 36010 16 500ml 洗瓶 20700

5 不銹鋼均質(zhì)器 20200 17 一次性測試管 34000