高效液相色譜法檢測牛奶，奶粉等產品中黃曲霉毒素M1操作規(guī)程
1. 儀器
高效液相色譜儀配熒光檢測器，震蕩器（或高速攪拌器），高速離心機
2. 試劑與試液
色譜甲醇，蒸餾水，乙腈+水（25+75），石油醚，2.5 10%乙腈， 氫氧化鈉溶液（0.5mol/L），玻璃纖維濾紙（PriboFast免疫親和柱免費贈送）
3. 測定法
本法系用高效液相色譜法（GB/T 18980-2003）測定牛奶，奶粉等產品中的黃曲霉毒素M1，除另有規(guī)定外，按下列方法測定。
3.1 色譜條件
色譜柱：C18柱，150×4.6mm，5um
檢測器：熒光檢測器；激發(fā)波長365nm，發(fā)射波長435nm；
流動相：乙腈-水（25：75）
流 速：1.0ml/min
進樣量：20ul
柱 溫：室溫
3.2 標準品溶液的配制
取黃曲霉毒素M1標準品，用乙腈稀釋成0.5ug/ml的標準儲備液。根據使用需要，準確吸取10μl、20μl、50μl、100μl、200μl的黃曲霉毒素標準儲備液，置5ml的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，配成相當于1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的標準工作液，即得。
3.3 樣品前處理
3.3.1牛奶
將100mL牛奶水浴加熱至40℃；
4000r/min離心15min，收集50mL清澈液待用；
3.3.2乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品
稱取10g奶粉樣品，將100mL50℃水多次少量加入，攪拌，使奶粉充分溶解；
6000r/min離心15min，收集50mL清澈液待用；
3.3.3發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)
稱取60 g混勻的試樣，用0.5 mol/L 的氫氧化鈉溶液在酸度計指示下調pH至7.4；
用高速均質器在 9500 轉/分鐘，高速勻漿5 min
水浴加熱至40℃；
4000r/min離心15min，收集50mL清澈液待用
3.3.4干酪
稱取經切細、過10目圓孔篩混勻的試樣5g置于50 mL離心管中，加2 mL水和30 mL甲醇；
用高速均質器在 9500r/分鐘，高速勻漿5 min；
超聲提取30 min；
在6000r/分鐘下離心15 min，收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。
在分液漏斗中加入30 mL石油醚，振搖2 min；
待分層后，將下層移于50 mL燒杯中，棄去石油醚層。
重復用石油醚提取2次；。
將下層溶液移到100 mL圓底燒瓶中，減壓濃縮至約2 mL；
濃縮液倒入離心管中，燒瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗滌，洗滌液一并倒入50 mL離心管中；
加水稀釋至約50 mL，在6000 轉/分鐘下離心 5 min，上清液供凈化處理。
3.3.5奶油
稱取5g試樣，置于50 mL燒杯中；
用20 mL石油醚將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。
加20 mL水和30 mL甲醇，振蕩30 min后，將全部液體移于分液漏斗中；
待分層后，將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中，在旋轉蒸發(fā)儀中減壓濃縮至約5 mL，加水稀釋至約50mL，供凈化處理。
3.4 供試品溶液的制備
3.4.1 PriboFast® 黃曲霉毒素M1免疫親和柱的操作
將免疫親和柱連接于50.0mL玻璃注射器下。準確移取50.0mL凈化溶液注入玻璃注射器；
將空氣壓力泵與注射器連接，調節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2～3mL空氣通過柱體；
更換10ml注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
準確加入4mL色譜級乙腈洗脫，流速為1 mL/min～2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。（建議將乙腈的量分2-4次加入。每次加入后，要讓甲醇充分浸泡柱子里的凝膠2分鐘。洗脫后的乙腈溶液，最好是水浴30℃加熱吹近干。用10%乙腈定容后上液相）
3.5 測定
精密量取1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的標準工作液各20ul，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。另精密量取供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，測定峰面積，從標準曲線上讀出供試品中相當于黃曲霉毒素M1的量，計算，即得。
1.本實驗應有相應的安全、防護措施，并不得污染環(huán)境。
2.殘留有黃曲霉毒素M1的廢液或廢渣的玻璃器皿，應置于專用貯存容器（裝有10%氯酸鈉溶液）內，浸泡24小時以上，再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。
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電話：010-63395349 63380700 52453171 52453170 13311089404
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PriboLab 是面向全球提供霉菌毒素檢測技術解決方案的主要服務商，憑借強大的研發(fā)團隊和霉菌毒素檢測技術的研究，為全球農業(yè)生產、食品加工與糧食、飼料工業(yè)等行業(yè)提供專業(yè)的真菌毒素檢測技術產品與技術服務。PriboFast酶聯(lián)免疫檢測試劑盒系列： PriboFast系列試劑盒全是采用直接競爭法，檢測時間短，步驟簡單，性能穩(wěn)定，檢測限符合國標要求。 黃曲霉毒素總量 ELISA試劑盒 96T 黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒 96T 黃曲霉毒素B1 ELISA試劑盒 96T 玉米赤霉烯酮 ELISA試劑盒 96T 嘔吐毒素 ELISA試劑盒 96T 赭曲霉毒素 ELISA試劑盒 96T 國產酶聯(lián)免疫檢測試劑盒系列 黃曲霉毒素總量 ELISA試劑盒 48T 黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒 48T 黃曲霉毒素B1 ELISA試劑盒 48T 玉米赤霉烯酮 ELISA試劑盒 48T 嘔吐毒素 ELISA試劑盒 48T 赭曲霉毒素 ELISA試劑盒 48T PriboFast系列多功能凈化柱系列： 包括有兩種類型 柱壓型（帶玻璃試管）/推桿型（針筒式） PriboFast○R系列多功能凈化柱采取的方法就是多重機制吸附雜質并快速萃取凈化的方法，，它將極性、非極性及離子交換等多類官能基團作為復合吸附填料作為填充劑填充到柱體中，這些填料可以選擇性的吸附樣品中的如脂類、蛋白類和色素等主要雜質吸附，同時將待測目標物（如中黃曲霉毒素 玉米赤霉烯酮等各種霉菌毒素）留在樣液中，從而達到凈化和富集的目的。 使用PriboFast○R 系列多功能凈化柱，能夠及時快速地對從食品、飼料、飲料、藥材中提取的待檢液進行凈化，過柱凈化后的樣品可以用于檢測黃曲霉毒素、 玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、雪腐鐮刀菌烯醇、3-乙�；撗跹└牭毒┐肌�15-乙�；撗跹└牭毒┐嫉榷喾N霉菌毒素。與一般的固相萃取柱（SPE）和親和柱相比，多功能凈化柱無需活化、上樣、洗脫等步驟，能夠將食品或飼料提取液中的雜質與真菌毒素進行一步分離，使用快捷、方便，減少萃取步驟，有效保證分析的更加準確可靠，降低檢測成本，有效提高檢測效率。 PriboFast 226/260多功能凈化柱（黃曲霉毒素，玉米赤霉烯酮）25T PriboFast 228/280多功能凈化柱（黃曲霉毒素，展青霉素）25T PriboFast 227/270(適用單端孢霉烯族毒素) 25T PriboFast 210 凈化柱（適用于伏馬毒素檢測）25T PriboFast 290凈化柱（適用于赭曲霉毒素檢測）25T PriboFast 230凈化柱（適用于環(huán)匹阿尼酸檢測）25T 北京泰樂祺科技有限公司 地 址：北京市豐臺區(qū)成壽寺路1#1206室（100164） 電 話：010-63395349 63380700 13311089404 網 址：www.rapid-bio.com E-mail：rapidbio@126.com
2012-4-11 12:40:00
PriboLab 是面向全球提供霉菌毒素檢測技術解決方案的主要服務商，憑借強大的研發(fā)團隊和霉菌毒素檢測技術的研究，為全球農業(yè)生產、食品加工與糧食、飼料工業(yè)等行業(yè)提供專業(yè)的真菌毒素檢測技術產品與技術服務。PriboFast酶聯(lián)免疫檢測試劑盒系列： PriboFast系列試劑盒全是采用直接競爭法，檢測時間短，步驟簡單，性能穩(wěn)定，檢測限符合國標要求。 黃曲霉毒素總量 ELISA試劑盒 96T 黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒 96T 黃曲霉毒素B1 ELISA試劑盒 96T 玉米赤霉烯酮 ELISA試劑盒 96T 嘔吐毒素 ELISA試劑盒 96T 赭曲霉毒素 ELISA試劑盒 96T 國產酶聯(lián)免疫檢測試劑盒系列 黃曲霉毒素總量 ELISA試劑盒 48T 黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒 48T 黃曲霉毒素B1 ELISA試劑盒 48T 玉米赤霉烯酮 ELISA試劑盒 48T 嘔吐毒素 ELISA試劑盒 48T 赭曲霉毒素 ELISA試劑盒 48T PriboFast系列多功能凈化柱系列： 包括有兩種類型 柱壓型（帶玻璃試管）/推桿型（針筒式） PriboFast○R系列多功能凈化柱采取的方法就是多重機制吸附雜質并快速萃取凈化的方法，，它將極性、非極性及離子交換等多類官能基團作為復合吸附填料作為填充劑填充到柱體中，這些填料可以選擇性的吸附樣品中的如脂類、蛋白類和色素等主要雜質吸附，同時將待測目標物（如中黃曲霉毒素 玉米赤霉烯酮等各種霉菌毒素）留在樣液中，從而達到凈化和富集的目的。 使用PriboFast○R 系列多功能凈化柱，能夠及時快速地對從食品、飼料、飲料、藥材中提取的待檢液進行凈化，過柱凈化后的樣品可以用于檢測黃曲霉毒素、 玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、雪腐鐮刀菌烯醇、3-乙�；撗跹└牭毒┐肌�15-乙�；撗跹└牭毒┐嫉榷喾N霉菌毒素。與一般的固相萃取柱（SPE）和親和柱相比，多功能凈化柱無需活化、上樣、洗脫等步驟，能夠將食品或飼料提取液中的雜質與真菌毒素進行一步分離，使用快捷、方便，減少萃取步驟，有效保證分析的更加準確可靠，降低檢測成本，有效提高檢測效率。 PriboFast 226/260多功能凈化柱（黃曲霉毒素，玉米赤霉烯酮）25T PriboFast 228/280多功能凈化柱（黃曲霉毒素，展青霉素）25T PriboFast 227/270(適用單端孢霉烯族毒素) 25T PriboFast 210 凈化柱（適用于伏馬毒素檢測）25T PriboFast 290凈化柱（適用于赭曲霉毒素檢測）25T PriboFast 230凈化柱（適用于環(huán)匹阿尼酸檢測）25T 北京泰樂祺科技有限公司 地 址：北京市豐臺區(qū)成壽寺路1#1206室（100164） 電 話：010-63395349 63380700 13311089404 網 址：www.rapid-bio.com E-mail：rapidbio@126.com
2012-4-11 12:40:00
匿名 (111.194.232.89)
北京泰樂祺科技有限公司專業(yè)提供致病菌、生物毒素、轉基因以及藥物殘留等檢測技術與產品服務，是國內最專業(yè)的真菌毒素檢測產品和分析服務的公司，不僅提供全系列的真菌毒素液體和固體標準品，前處理用的凈化柱和免疫親和柱、試劑盒等，而且提供快速準確的分析檢測業(yè)務。 分析檢測的霉菌毒素種類： ■黃曲霉毒素類：黃曲霉毒素B1，黃曲霉毒素B2，黃曲霉毒素G1，黃曲霉毒素G2，黃曲霉毒素M1，黃曲霉毒素B1,B2,G1,G2總量 ■ A/B型單端孢霉烯族化合物: T-2毒素，HT-2毒素，蛇形毒素(Diacetoxyscirpenol) ，二醋酸麃草鐮刀菌烯醇(Neosolaniol)，嘔吐毒素(DON)，3-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(3 Acetyl DON)，5-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(15 Acetyl DON)，雪腐鐮刀菌烯醇(Nivalenol)，鐮刀菌烯酮-X(Fusarenon-X) ■ 伏馬毒素類：伏馬毒素B1(fumonisin B1)，伏馬毒素B2(fumonisin B2) ■ 玉米赤霉烯酮(zearalenone)，赭曲霉毒素A(ochratoxin A) ■ 桔青霉素(Citrinin)，展青霉素(patulin) 采用技術手段： 高效液相色譜法、薄層層析TLC法、酶聯(lián)免疫法 提供霉菌毒素檢測服務的樣品種類： ■ 原糧類(如谷物、玉米、大豆等) ■ 飼料及原料類(如豆粕、玉米、寵物食品) ■ 食品原料(包括淀粉 大米蛋白 玉米蛋白 谷朊粉 糧油 面粉 大豆制品等) ■ 糧食及其加工品 食品、飼料成分分析： 可為釀酒、果汁、食品和飼料工業(yè)提供有機酸、糖類醇類物質檢測服務。 ■ 有機酸定量分析：包括蘋果酸、檸檬酸、乙酸、乳酸、丙酮酸等。 ■ 糖和醇類定量分析：主要有乳糖、D-半乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、乙醇、甘露醇、甘油等。 ■ 其他物質分析：氨、尿素、酮體、肉堿、膳食纖維、亞硫酸鹽、二氧化硫、重金屬鐵銅。 提供真菌毒素的檢測培訓： 培訓內容包括：高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫法、薄層層析TLC法。 培訓費用：僅收取耗材費用(學員可以自帶2個樣品)。 公司網址： www.rapid-bio.com 公司郵箱： rapidtest@163.com 聯(lián) 系 人：劉紅兵 聯(lián)系電話：010-633380700 13311089404
2012-4-1 8:44:00
北京泰樂祺科技有限公司專業(yè)提供致病菌、生物毒素、轉基因以及藥物殘留等檢測技術與產品服務，是國內最專業(yè)的真菌毒素檢測產品和分析服務的公司，不僅提供全系列的真菌毒素液體和固體標準品，前處理用的凈化柱和免疫親和柱、試劑盒等，而且提供快速準確的分析檢測業(yè)務。 分析檢測的霉菌毒素種類： ■黃曲霉毒素類：黃曲霉毒素B1，黃曲霉毒素B2，黃曲霉毒素G1，黃曲霉毒素G2，黃曲霉毒素M1，黃曲霉毒素B1,B2,G1,G2總量 ■ A/B型單端孢霉烯族化合物: T-2毒素，HT-2毒素，蛇形毒素(Diacetoxyscirpenol) ，二醋酸麃草鐮刀菌烯醇(Neosolaniol)，嘔吐毒素(DON)，3-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(3 Acetyl DON)，5-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(15 Acetyl DON)，雪腐鐮刀菌烯醇(Nivalenol)，鐮刀菌烯酮-X(Fusarenon-X) ■ 伏馬毒素類：伏馬毒素B1(fumonisin B1)，伏馬毒素B2(fumonisin B2) ■ 玉米赤霉烯酮(zearalenone)，赭曲霉毒素A(ochratoxin A) ■ 桔青霉素(Citrinin)，展青霉素(patulin) 采用技術手段： 高效液相色譜法、薄層層析TLC法、酶聯(lián)免疫法 提供霉菌毒素檢測服務的樣品種類： ■ 原糧類(如谷物、玉米、大豆等) ■ 飼料及原料類(如豆粕、玉米、寵物食品) ■ 食品原料(包括淀粉 大米蛋白 玉米蛋白 谷朊粉 糧油 面粉 大豆制品等) ■ 糧食及其加工品 食品、飼料成分分析： 可為釀酒、果汁、食品和飼料工業(yè)提供有機酸、糖類醇類物質檢測服務。 ■ 有機酸定量分析：包括蘋果酸、檸檬酸、乙酸、乳酸、丙酮酸等。 ■ 糖和醇類定量分析：主要有乳糖、D-半乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、乙醇、甘露醇、甘油等。 ■ 其他物質分析：氨、尿素、酮體、肉堿、膳食纖維、亞硫酸鹽、二氧化硫、重金屬鐵銅。 提供真菌毒素的檢測培訓： 培訓內容包括：高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫法、薄層層析TLC法。 培訓費用：僅收取耗材費用(學員可以自帶2個樣品)。 公司網址： www.rapid-bio.com 公司郵箱： rapidtest@163.com 聯(lián) 系 人：劉紅兵 聯(lián)系電話：010-633380700 13311089404
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Pribolab 是面向全球的專業(yè)霉菌毒素檢測解決方案服務商，北京泰樂祺科技有限公司負責Pribolab的PriboFast霉菌毒素檢測系列產品在中國區(qū)市場的宣傳和推廣,包括霉菌毒素免疫親和柱,霉菌毒素酶聯(lián)免疫試劑盒,霉菌毒素多功能凈化柱,霉菌毒素標準品和質控樣品,黃曲霉毒素光化學柱后衍生裝置等產品和技術服務。 2012年3月27，28日在第五屆食品安全高峰論壇（國家會議中心）29號展位恭候您蒞臨我公司展位參觀、指導和洽談合作北京泰樂祺科技有限公司 www.rapid-bio.com 聯(lián)系電話：010－63395349 63380700 13311089404 如有更多產品需求與查詢,請及時接洽：www.rapid-bio.com 或在我公司查詢主頁客戶留言處（http://www.rapid-bio.com/NetBook.asp#）留下您的查詢內容，我們即會在當天為您作出回復。 如您對檢測霉菌毒素有任何技術問題或對方法開發(fā)有疑問可來電咨詢我們 ！
2012-3-23 13:43:00
Pribolab 是面向全球的專業(yè)霉菌毒素檢測解決方案服務商，北京泰樂祺科技有限公司負責Pribolab的PriboFast霉菌毒素檢測系列產品在中國區(qū)市場的宣傳和推廣,包括霉菌毒素免疫親和柱,霉菌毒素酶聯(lián)免疫試劑盒,霉菌毒素多功能凈化柱,霉菌毒素標準品和質控樣品,黃曲霉毒素光化學柱后衍生裝置等產品和技術服務。 2012年3月27，28日在第五屆食品安全高峰論壇（國家會議中心）29號展位恭候您蒞臨我公司展位參觀、指導和洽談合作北京泰樂祺科技有限公司 www.rapid-bio.com 聯(lián)系電話：010－63395349 63380700 13311089404 如有更多產品需求與查詢,請及時接洽：www.rapid-bio.com 或在我公司查詢主頁客戶留言處（http://www.rapid-bio.com/NetBook.asp#）留下您的查詢內容，我們即會在當天為您作出回復。 如您對檢測霉菌毒素有任何技術問題或對方法開發(fā)有疑問可來電咨詢我們 ！
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2012-3-16 10:35:00
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2012-3-16 10:35:00
匿名 (111.194.246.31)
北京泰樂祺科技有限公司，專注霉菌毒素檢測與技術產品與服務，擁有多名專業(yè)人員和完備的檢測實驗室，尤其是在霉菌毒素檢測方面。已與多家飼料、食品、保健品企業(yè)簽訂合約，提供檢驗服務。并且承擔著國內多家第三方檢測機構真菌毒素檢測外包業(yè)務。如果您在養(yǎng)殖及生產中對霉菌毒素的污染、危害有任何疑問，可以隨時來電咨詢我們，也可以委托我們對飼料及飼料原料進行霉菌毒素污染程度進行鑒定。聯(lián)系電話：010-633380700 13311089404 公司網址： www.rapid-bio.com 公司郵箱： rapidtest@163.com
2012-3-13 12:10:00
北京泰樂祺科技有限公司，專注霉菌毒素檢測與技術產品與服務，擁有多名專業(yè)人員和完備的檢測實驗室，尤其是在霉菌毒素檢測方面。已與多家飼料、食品、保健品企業(yè)簽訂合約，提供檢驗服務。并且承擔著國內多家第三方檢測機構真菌毒素檢測外包業(yè)務。如果您在養(yǎng)殖及生產中對霉菌毒素的污染、危害有任何疑問，可以隨時來電咨詢我們，也可以委托我們對飼料及飼料原料進行霉菌毒素污染程度進行鑒定。聯(lián)系電話：010-633380700 13311089404 公司網址： www.rapid-bio.com 公司郵箱： rapidtest@163.com
2012-3-13 12:10:00
