氯霉素殘留及檢測
瀏覽次數(shù):3344 發(fā)布日期:2009-3-16
來源:河南知微生物工程有限公司
氯霉素最初是從委內(nèi)瑞拉鏈絲菌的培養(yǎng)液中提取制得,現(xiàn)在用化學(xué)合成法大量生產(chǎn)。是一類廣譜抗生素。對革蘭氏陽性、革蘭氏陰性細(xì)菌均有抑制作用。其中對傷寒桿菌、流感桿菌和百日咳桿菌物作用比其它抗生素強(qiáng),對立克次體感染如斑疹傷寒也有效,但是對革蘭氏陽性球菌的作用不及青霉素和四環(huán)素。
1、理化特性:性質(zhì)穩(wěn)定,在干燥狀態(tài)下可保存藥效達(dá)2年以上,易溶于有機(jī)溶劑,25℃時(shí)100ml水中僅溶解25mg。水溶液呈中性,在酸性和中性溶液中較穩(wěn)定,遇堿類易分解失效。其合成品具有左旋光性,也稱左霉素 ( Laevomycetin )。
2、化學(xué)結(jié)構(gòu):氯霉素是一類1-苯基-2氨基-1丙醇的二乙酰胺衍生物。這類獨(dú)特的抗生素通常由以下三種化合物組成:氯霉素(CAP),甲砜(氯)霉素(THA),氟甲砜(氯)霉素(FLR)。上述三種抗生素都具有共同的主鏈架,其結(jié)構(gòu)如圖所示,它們均被稱為:“苯醇類”。
化合物名稱 |
R1 |
R2 |
R3 |
CAP |
NO |
OH |
COCHCl2 |
THA |
CH3SO2 |
OH |
COCHCl2 |
FLR |
CH3SO2 |
F |
COCHCl2 |
《多個(gè)取代基的1-苯基-2氨基-1丙醇主鏈》
3、抑菌機(jī)理:氯霉素屬抑菌劑,高濃度時(shí)或作用于對本品成高度敏感的細(xì)菌時(shí)呈殺菌作用,為脂溶性,通過彌散進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞內(nèi),并可逆的結(jié)合在細(xì)菌核糖體的50S亞基上,使肽鏈增長受阻,因此抑制了肽鏈的形成,從而阻止蛋白質(zhì)的合成。
二、氯霉素殘留現(xiàn)狀及影響
2002年的上半年,圍繞著動(dòng)物源性食品中國與歐盟之間引發(fā)了一系列貿(mào)易紛爭。2002年1月28日,歐盟以氯霉素殘留為由宣布全面禁止從中國進(jìn)口動(dòng)物源性食品。此項(xiàng)“禁令”封殺了中國每年約7億美元的相關(guān)產(chǎn)品出口。中國方面迅速就此作出回應(yīng)。外經(jīng)貿(mào)部新聞發(fā)言人高燕發(fā)表談話時(shí)稱中方對此事給予嚴(yán)重關(guān)注。并指出,歐盟僅憑沒有征求中方意見的考察報(bào)告,單方面作出決定,是不公正、不合理的。歐盟是我國蜂蜜傳統(tǒng)出口市場,年進(jìn)口蜂蜜15萬噸,其中,自我國進(jìn)口3-4萬噸,占其進(jìn)口蜂蜜總量的27%左右,據(jù)我國海關(guān)統(tǒng)計(jì),2001年我對歐盟出口蜂蜜4.3萬噸,占全球出口總量的41%。2月7日,英國以氯霉素超標(biāo)為由停止銷售中國蜂蜜, 2月中下旬,英國食品標(biāo)準(zhǔn)局在市場上抽樣檢測中查出我國蜂蜜含歐盟禁用藥物——氯霉素殘留,發(fā)生了上市中國蜂蜜被召回的惡性事件。并影響到了中國蜂蜜對日本、加拿大等國的出口。中國國家質(zhì)檢總局專門就氯霉素音量先后下發(fā)了兩個(gè)緊急通知(國質(zhì)檢食函[2001]510號、國質(zhì)檢食函[2001]578號),禁止在出口水產(chǎn)品的飼料、養(yǎng)殖(包括環(huán)境、器械等的消毒)、加工、保鮮、包裝和運(yùn)輸?shù)壬a(chǎn)環(huán)節(jié)使用氯霉素,并要求各地檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)加強(qiáng)對出口,限期整改,對如期驗(yàn)收不合格的企業(yè)將取消其出口注冊資格,禁止其產(chǎn)品出口2002年8月21日農(nóng)業(yè)部和國家質(zhì)檢總局發(fā)出聯(lián)合通知,聲明將對中國水產(chǎn)品進(jìn)行專項(xiàng)整治,以盡快削除藥物對中國水產(chǎn)品的危害。
三、危害及影響
1、 骨髓造血機(jī)能紊亂: 氯霉素對骨髓販造血機(jī)能有抑制作用,可引起血小板減少性紫殿、粒細(xì)胞缺乏癥、再生障礙性貧血、溶血性等,多數(shù)在長期或多次用藥的過程中發(fā)生。發(fā)生率約為1/100000-1/5000。骨髓的毒性分為兩類:一是可逆性抑制。主要影響紅細(xì)胞、血小板和白細(xì)胞的形成。二是再生障礙性貧血。前者與劑量有關(guān),藥物的血濃度走過5ug/ml即可出現(xiàn);后者少見,發(fā)生較晚而極為嚴(yán)重,與氯霉素的每日用量和總量均無直接關(guān)系。
2、 對早產(chǎn)兒和新生兒的毒性: 在早產(chǎn)兒和新生兒肝內(nèi)有些酶系統(tǒng)發(fā)育尚不完全,葡萄糖醛酸結(jié)合的能力較差,因此影響氯霉素在肝中的解毒過程;此外,腎臟排泄能力亦較弱,能招致藥物蓄積中毒。
3、 胃腸道癥狀、口部癥狀:胃腸道反應(yīng)主要有腹脹、腹瀉、食欲減退惡心、嘔吐則少見?诓堪Y狀如口腔粘膜充血、疼痛、糜爛、口角炎和舌炎等。
4、 其它不良反應(yīng): 可引起視神經(jīng)炎、視力障礙、多發(fā)性神經(jīng)炎、神經(jīng)性耳聾以及嚴(yán)重失眠。有時(shí)發(fā)生中毒性精神病,主要表現(xiàn)為幻視、幻聽、定向力喪失、精神失常等。
四、部分國家檢驗(yàn)檢疫要求:
● 1999年9月13日中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》的通知,規(guī)定了氯霉素在所有食品動(dòng)物的可食用組織中不得檢出。
● 中國農(nóng)業(yè)部已將氯霉素從2000年版《中國獸藥典》中刪除列為禁藥。
● 2002年1月,美國食品與藥品管理局(FDA)公布了禁止在進(jìn)口動(dòng)物源性食品中使用氯霉素
● 歐盟的進(jìn)口食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定“氯霉素含量標(biāo)準(zhǔn)為不得檢出!逼洹安坏脵z出”的含義是氯霉素含量在1ppb以下,即含量在十億分之一經(jīng)以下。
● 德國部分州的特殊檢測標(biāo)準(zhǔn)為0.2ppb。
● 我國方法檢測限量值:
牛奶 0.25ng/ml 肉類1.5ng/g 尿液1.0ng/ml
血清0.5ng/ml 蜂蜜 (快檢)1.5ng/g 蜂蜜 (18柱) 0.1ng/g
五、氯霉素殘留的檢測方法:
(一)液相色譜法:
以乙酸乙酯提取,取部分乙酸乙酯提取液,用氮?dú)獯等ヒ宜嵋阴ズ?殘?jiān)芙庥诟呗人嶂。用正已烷抽去脂?用配有紫外線檢測器的液相色譜儀測定,外標(biāo)法定量。
(二)氣相色譜法:
組織經(jīng)β-葡萄糖醛酸酶消化,經(jīng)乙酸乙酯提取,然后將乙酸乙酯濃縮。加4%氯化鈉溶液,剩余的乙酸乙酯用氮?dú)獯蹈伞Ⅺ}溶液過C18萃取小柱,用20%甲醇洗滌,用甲醇洗脫。將洗脫液蒸發(fā)至干并固化,用配有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀測定氯霉素。異氯霉素做內(nèi)標(biāo)物定量。本方法在牛肌肉組織的檢測限為1.0ng/g。
(三)酶聯(lián)免疫檢測法
目前國內(nèi)檢測瘦肉精都是用ELISA法篩選,再用GS-MS或HPLC確證。ELISA測定法是酶標(biāo)記的抗體或抗抗體來進(jìn)行的抗原-抗體反應(yīng)。由于酶的專一性催化作用,可使原來無色的底物通過水解,氧化或還原反應(yīng)而顯示顏色,所以該法的優(yōu)點(diǎn)是:1、可以通過顏色來快速做定性結(jié)果分析;2、特異性強(qiáng);3、靈敏度高;4、酶標(biāo)板上一次可作多份樣品檢測。
ELISA法原理是利用免疫學(xué)抗原抗體特異性結(jié)合和酶的高效催化作用,通過化學(xué)方法將植物辣根過氧化物酶(HRP)與氯霉素結(jié)合,形成酶偶聯(lián)氯霉素。將固相載體上已包被的抗體(羊抗兔lgG抗體)與特異性的抗克倫特羅抗體結(jié)合,然后加入待測氯霉素和酶偶聯(lián)氯霉素,它們競爭性與氯霉素抗體結(jié)合,洗滌后加底物,根據(jù)有色物的變化計(jì)量待測氯霉素的量。若待測氯霉素多,則被結(jié)合的酶偶聯(lián)氯霉素少,有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的氯霉素含量,比色的最佳波長為450nm,參比波長應(yīng)大于650nm 。