主要用途
YT微孔板使用固定在微孔板上的94個不同的生化試驗來對廣泛的酵母菌提供表型概況并  進(jìn)行鑒定。Biolog鑒定系統(tǒng)中的軟件（MicrologTM 3）通過讀取YT微孔板上所表現(xiàn)出的表型圖譜 來對細(xì)菌進(jìn)行鑒定。
概述
1、Biolog YT微孔板通過微生物對微孔板中的不同碳源的利用及氧化情況進(jìn)行測試，測試 使得有特征代謝的孔變成紫色，從而使微生物在測試板上顯示出“代謝指紋圖譜 ”1，2。 
2、所有必要的營養(yǎng)物質(zhì)以及生化試劑都被預(yù)先填充、干化在96個孔中。在一部分孔中  （A-C行），四唑類氧化還原染料通過色度的變化來指示碳源的氧化情況。而剩下的孔（D-H行）則通過濁度的變化來顯示微生物對碳源的利用情況。 
3、試驗的操作過程非常簡單。在平板上按照常規(guī)方法劃線分離需要鑒定的微生物，然后 將分離的到的純種用棉簽挑到無菌水中，配成指定細(xì)胞濃度的菌懸液。將菌懸液按每 孔100µl的量加到Y(jié)T板后孵育。所有的孔在剛開始的時候都是無色的，當(dāng)孵育一段時 間之后，那些能被細(xì)胞利用的碳源孔中的呼吸作用增強(qiáng)了。增強(qiáng)的呼吸作用導(dǎo)致四唑 氧化還原染料被還原，變成紫色。同時，能被利用的碳源孔中的微生物也開始生長， 導(dǎo)致濁度變高。YT板的兩個陰性對照孔（A1和D1）中不含碳源。 
4、孵育后24，48或者72小時后，通過YT板上顯紫色及濁度變化所產(chǎn)生的指紋圖譜同   Biolog數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比對。如果找到匹配的，所分離出來的微生物得到鑒定。

注意事項
       為獲取準(zhǔn)確且可重復(fù)的結(jié)果，請務(wù)必遵循下列建議：
1、純培養(yǎng)是一切鑒定的前提，
2、使用專用培養(yǎng)基進(jìn)行活化培養(yǎng)非常重要，同一菌株可能會由于接種前在不同的培養(yǎng)基上生 長而在鑒定時產(chǎn)生不同的代謝特征。
3、無菌操作，避免污染影響結(jié)果。
4、應(yīng)盡量使用一次性玻璃器皿來處理所有細(xì)胞懸液和其他溶液。已經(jīng)清洗過的玻璃器皿可能 含有微量的皂劑或洗滌劑，會影響到結(jié)果。
5、在使用前將YT微孔板及無菌水接種液預(yù)熱到室溫。一些菌種對冷沖擊非常敏感。
6、準(zhǔn)確校正濁度儀，使菌懸液濃度位于指定的濃度范圍。請參考“接種液制備”這一部分內(nèi) 容。
7、YT鑒定板上包被的化學(xué)物質(zhì)對溫度和光敏感。AN微孔板請置于2-8℃冰箱，避光保存。如 孔顏色為深褐色表示鑒定板碳源已變質(zhì)。一些孔本身就是黃色或淺紅色，這是正常的。
8、請永遠(yuǎn)記�。耗阏�在測試的是活細(xì)胞的代謝特性。一些菌種在受到應(yīng)激作用（如溫度、pH 及滲透壓變化）時會失去代謝活力，哪怕是僅僅幾分鐘。為了從這些微孔板上獲得可接受 的最佳效果，請意識到這些細(xì)胞是活的，并小心的對待它們。
9、檢查 YT 鑒定板：
      請勿使用過期的 YT 鑒定板。要將其帶著外包裝放于 2-8℃冰箱，避光保存。

試劑及耗材 plate streakers (10x100); Catalog No.3026 (50x20).
6、Transfer Pipets無菌一次性移液管: Catalog No.3019- Sterile disposable 9 inch transfer pipets.
7、Reservoirs無菌一次性V型加樣槽: Catalog No.3102- Sterile disposable reservoirs.
8、Multichannel Pipettes多道移液器: Catalog No.3711- 8 channel electronic pipettor.
9、Pipet Tips無菌移液器吸頭: Catalog No. 3201- Sterile racked pipet tips for Ovation multichannel pipettor; Catalog No. 3001- Matrix multichannel pipettor tips.
10、Turbidimeter濁度計: Catalog No.3531- 110 volt model, Catalog No.3532 -220 volt model, Catalog No.3585 - 240 volt model.
11、Turbidity Standards標(biāo)準(zhǔn)比濁管: YT (Biolog Catalog #3415).
12、Incubator 培養(yǎng)箱：26℃ .

操作規(guī)程
      做實(shí)驗前，先將YT鑒定板和接種液恢復(fù)至室溫25度。 3、接種時不要將培養(yǎng)基挑進(jìn)接種液，先用棉棒蘸些接種液，蘸取菌后在接種液液體上面管壁上反復(fù)涂使其分散，然后利用接種液將其沖洗下制備成均一接種液。也可利用無菌吸管混 勻菌液，但應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。如果還有未打散的菌塊，將接種液靜置幾分鐘，使之沉淀下去。
4、準(zhǔn)確調(diào)整菌懸液的菌體濃度到47%T，上下偏差2%。如濃度太高可以加入一些新的接種液， 如濃度太低則繼續(xù)加入更多菌。
5、制備好菌懸液后，菌懸液倒入v型槽，然后迅速接到板上。接菌懸液的過程不超過20min（超 過20min，一些菌會因失去氮源喪失代謝活力）。
 
第四步：接種至鑒定板
1、迅速將配制好的菌懸液倒入V型槽中（不要將沉淀倒入），并用移液器將菌懸液接種至YT 板上（每孔100 μl）。
2、接種完后，蓋上微孔板蓋子。
 
第五步：培養(yǎng)鑒定板
1、將鑒定板置于26℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、注意保持培養(yǎng)環(huán)境的濕度，以減少微孔板中菌液的蒸發(fā)。可以使用在可密封的塑料盒中放
置濕紙巾或砂布，再將微孔板放置其中的方法來保濕。
3、培養(yǎng)鑒定板24，48或者72h，直到微孔板圖譜形成。

結(jié)果
1、培養(yǎng)完畢后請使用MicrologTM 3軟件進(jìn)行結(jié)果獲取，請參見軟件說明書。
2、A1孔作為A-C行的參照孔，D1孔作為D-H行的參照孔。以590nm波長分別測試A-C行的顏 色變化，以及D-H行的濁度變化。一般酵母菌鑒定板的圖譜很難用肉眼來判讀。
3、“假陽性”是指A1，D1 還有其他本該陰性的孔顯示陽性反應(yīng)。（A1孔顯紫色，D1孔產(chǎn)生 濁度變化）�？赡艿脑�因包括細(xì)胞利用了自身的胞外多糖，儲存的內(nèi)源底物，或細(xì)胞裂解的 物質(zhì)。不正確使用鑒定板也可能產(chǎn)生假陽性，請參考“問題解答”部分。一些酵母菌利用 碳源生成帶有顏色的（如褐色）的副產(chǎn)物。這種情況應(yīng)看作“陽性”反應(yīng)。
4、對于YT鑒定板，培養(yǎng)24小時后，只有當(dāng)相似度指數(shù)（Similarity Index）大于0.75 ，鑒定結(jié) 果才能被接受；而48或72小時培養(yǎng)后，值大于0.5時，鑒定結(jié)果才能被接受。

問題解答
如1-9列全是陽性，請確認(rèn)：
1、確保該菌株適于用YT鑒定板來鑒定。
2、制作菌懸液時，確保不要將平板培養(yǎng)基（含氮源）也挑進(jìn)接種液中。
3、菌懸液濃度不要過量，檢查并校正濁度儀。
4、確保菌懸液的均一，不含菌塊。
5、A1，D1孔作為對照孔，加液時不要少加，應(yīng)與其它孔一致。
 
如1-9列全是陰性，請確認(rèn)：
1、確保該菌株適于用 YT 鑒定板來鑒定。
2、需要新鮮培養(yǎng)的酵母菌，使用推薦的培養(yǎng)基BUY。
3、接種液和鑒定板使用前恢復(fù)到室溫，正確制備菌懸液，有合適的pH值和鹽度，不含防腐劑。
4、盡量用一次性的器皿處理細(xì)胞（洗刷過的器皿殘留的皂劑對細(xì)胞有毒害）。
5、接種液濃度要達(dá)到特定的濁度，檢查并校正濁度儀。
6、用正確的培養(yǎng)溫度進(jìn)行培養(yǎng)。
7、A1，D1孔作為對照，不要將菌懸液加的過多，與其它孔保持一致。

局限性
       YT數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建是通過對微生物做大量代謝特征驗證后得到的。YT板通常只能鑒定包含在 當(dāng)前數(shù)據(jù)庫中的菌株。非典型菌株通常只會報告“No Identification”。而培養(yǎng)72小時后SIM低 于0.5的都將報告為“No Identification ”。

質(zhì)控菌種
當(dāng)用凍干菌株時，至少要傳兩代，使其恢復(fù)活性， 并調(diào)節(jié)其相應(yīng)的生理狀態(tài)。
鑒定板培養(yǎng)48h，上讀數(shù)儀讀板。如果鑒定結(jié)果不符合，重新看一下操作流程，檢查菌株是否純。