Biolog YT板的主要用途、使用流程及注意事項(xiàng)
主要用途
YT微孔板使用固定在微孔板上的94個(gè)不同的生化試驗(yàn)來對(duì)廣泛的酵母菌提供表型概況并 進(jìn)行鑒定。Biolog鑒定系統(tǒng)中的軟件（MicrologTM 3）通過讀取YT微孔板上所表現(xiàn)出的表型圖譜 來對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒定。
概述
1、Biolog YT微孔板通過微生物對(duì)微孔板中的不同碳源的利用及氧化情況進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試 使得有特征代謝的孔變成紫色，從而使微生物在測(cè)試板上顯示出“代謝指紋圖譜 ”1，2。
2、所有必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及生化試劑都被預(yù)先填充、干化在96個(gè)孔中。在一部分孔中 （A-C行），四唑類氧化還原染料通過色度的變化來指示碳源的氧化情況。而剩下的孔（D-H行）則通過濁度的變化來顯示微生物對(duì)碳源的利用情況。
3、試驗(yàn)的操作過程非常簡(jiǎn)單。在平板上按照常規(guī)方法劃線分離需要鑒定的微生物，然后 將分離的到的純種用棉簽挑到無(wú)菌水中，配成指定細(xì)胞濃度的菌懸液。將菌懸液按每 孔100µl的量加到Y(jié)T板后孵育。所有的孔在剛開始的時(shí)候都是無(wú)色的，當(dāng)孵育一段時(shí) 間之后，那些能被細(xì)胞利用的碳源孔中的呼吸作用增強(qiáng)了。增強(qiáng)的呼吸作用導(dǎo)致四唑 氧化還原染料被還原，變成紫色。同時(shí)，能被利用的碳源孔中的微生物也開始生長(zhǎng)， 導(dǎo)致濁度變高。YT板的兩個(gè)陰性對(duì)照孔（A1和D1）中不含碳源。
4、孵育后24，48或者72小時(shí)后，通過YT板上顯紫色及濁度變化所產(chǎn)生的指紋圖譜同 Biolog數(shù)據(jù)庫(kù)中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)。如果找到匹配的，所分離出來的微生物得到鑒定。
注意事項(xiàng)
為獲取準(zhǔn)確且可重復(fù)的結(jié)果，請(qǐng)務(wù)必遵循下列建議：
1、純培養(yǎng)是一切鑒定的前提，
2、使用專用培養(yǎng)基進(jìn)行活化培養(yǎng)非常重要，同一菌株可能會(huì)由于接種前在不同的培養(yǎng)基上生 長(zhǎng)而在鑒定時(shí)產(chǎn)生不同的代謝特征。
3、無(wú)菌操作，避免污染影響結(jié)果。
4、應(yīng)盡量使用一次性玻璃器皿來處理所有細(xì)胞懸液和其他溶液。已經(jīng)清洗過的玻璃器皿可能 含有微量的皂劑或洗滌劑，會(huì)影響到結(jié)果。
5、在使用前將YT微孔板及無(wú)菌水接種液預(yù)熱到室溫。一些菌種對(duì)冷沖擊非常敏感。
6、準(zhǔn)確校正濁度儀，使菌懸液濃度位于指定的濃度范圍。請(qǐng)參考“接種液制備”這一部分內(nèi) 容。
7、YT鑒定板上包被的化學(xué)物質(zhì)對(duì)溫度和光敏感。AN微孔板請(qǐng)置于2-8℃冰箱，避光保存。如 孔顏色為深褐色表示鑒定板碳源已變質(zhì)。一些孔本身就是黃色或淺紅色，這是正常的。
8、請(qǐng)永遠(yuǎn)記住：你正在測(cè)試的是活細(xì)胞的代謝特性。一些菌種在受到應(yīng)激作用（如溫度、pH 及滲透壓變化）時(shí)會(huì)失去代謝活力，哪怕是僅僅幾分鐘。為了從這些微孔板上獲得可接受 的最佳效果，請(qǐng)意識(shí)到這些細(xì)胞是活的，并小心的對(duì)待它們。
9、檢查 YT 鑒定板：
請(qǐng)勿使用過期的 YT 鑒定板。要將其帶著外包裝放于 2-8℃冰箱，避光保存。
試劑及耗材
6、Transfer Pipets無(wú)菌一次性移液管: Catalog No.3019- Sterile disposable 9 inch transfer pipets.
7、Reservoirs無(wú)菌一次性V型加樣槽: Catalog No.3102- Sterile disposable reservoirs.
8、Multichannel Pipettes多道移液器: Catalog No.3711- 8 channel electronic pipettor.
9、Pipet Tips無(wú)菌移液器吸頭: Catalog No. 3201- Sterile racked pipet tips for Ovation multichannel pipettor; Catalog No. 3001- Matrix multichannel pipettor tips.
10、Turbidimeter濁度計(jì): Catalog No.3531- 110 volt model, Catalog No.3532 -220 volt model, Catalog No.3585 - 240 volt model.
11、Turbidity Standards標(biāo)準(zhǔn)比濁管: YT (Biolog Catalog #3415).
12、Incubator 培養(yǎng)箱：26℃ .
操作規(guī)程
做實(shí)驗(yàn)前，先將YT鑒定板和接種液恢復(fù)至室溫25度。
4、準(zhǔn)確調(diào)整菌懸液的菌體濃度到47%T，上下偏差2%。如濃度太高可以加入一些新的接種液， 如濃度太低則繼續(xù)加入更多菌。
5、制備好菌懸液后，菌懸液倒入v型槽，然后迅速接到板上。接菌懸液的過程不超過20min（超 過20min，一些菌會(huì)因失去氮源喪失代謝活力）。
第四步：接種至鑒定板
1、迅速將配制好的菌懸液倒入V型槽中（不要將沉淀倒入），并用移液器將菌懸液接種至YT 板上（每孔100 μl）。
2、接種完后，蓋上微孔板蓋子。
第五步：培養(yǎng)鑒定板
1、將鑒定板置于26℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、注意保持培養(yǎng)環(huán)境的濕度，以減少微孔板中菌液的蒸發(fā)�？梢允褂迷诳擅芊獾乃芰虾兄蟹�
置濕紙巾或砂布，再將微孔板放置其中的方法來保濕。
3、培養(yǎng)鑒定板24，48或者72h，直到微孔板圖譜形成。
結(jié)果
1、培養(yǎng)完畢后請(qǐng)使用MicrologTM 3軟件進(jìn)行結(jié)果獲取，請(qǐng)參見軟件說明書。
2、A1孔作為A-C行的參照孔，D1孔作為D-H行的參照孔。以590nm波長(zhǎng)分別測(cè)試A-C行的顏 色變化，以及D-H行的濁度變化。一般酵母菌鑒定板的圖譜很難用肉眼來判讀。
3、“假陽(yáng)性”是指A1，D1 還有其他本該陰性的孔顯示陽(yáng)性反應(yīng)。（A1孔顯紫色，D1孔產(chǎn)生 濁度變化）�？赡艿脑虬�(xì)胞利用了自身的胞外多糖，儲(chǔ)存的內(nèi)源底物，或細(xì)胞裂解的 物質(zhì)。不正確使用鑒定板也可能產(chǎn)生假陽(yáng)性，請(qǐng)參考“問題解答”部分。一些酵母菌利用 碳源生成帶有顏色的（如褐色）的副產(chǎn)物。這種情況應(yīng)看作“陽(yáng)性”反應(yīng)。
4、對(duì)于YT鑒定板，培養(yǎng)24小時(shí)后，只有當(dāng)相似度指數(shù)（Similarity Index）大于0.75 ，鑒定結(jié) 果才能被接受；而48或72小時(shí)培養(yǎng)后，值大于0.5時(shí)，鑒定結(jié)果才能被接受。
問題解答
如1-9列全是陽(yáng)性，請(qǐng)確認(rèn)：
1、確保該菌株適于用YT鑒定板來鑒定。
2、制作菌懸液時(shí)，確保不要將平板培養(yǎng)基（含氮源）也挑進(jìn)接種液中。
3、菌懸液濃度不要過量，檢查并校正濁度儀。
4、確保菌懸液的均一，不含菌塊。
5、A1，D1孔作為對(duì)照孔，加液時(shí)不要少加，應(yīng)與其它孔一致。
如1-9列全是陰性，請(qǐng)確認(rèn)：
1、確保該菌株適于用 YT 鑒定板來鑒定。
2、需要新鮮培養(yǎng)的酵母菌，使用推薦的培養(yǎng)基BUY。
3、接種液和鑒定板使用前恢復(fù)到室溫，正確制備菌懸液，有合適的pH值和鹽度，不含防腐劑。
4、盡量用一次性的器皿處理細(xì)胞（洗刷過的器皿殘留的皂劑對(duì)細(xì)胞有毒害）。
5、接種液濃度要達(dá)到特定的濁度，檢查并校正濁度儀。
6、用正確的培養(yǎng)溫度進(jìn)行培養(yǎng)。
7、A1，D1孔作為對(duì)照，不要將菌懸液加的過多，與其它孔保持一致。
局限性
YT數(shù)據(jù)庫(kù)的構(gòu)建是通過對(duì)微生物做大量代謝特征驗(yàn)證后得到的。YT板通常只能鑒定包含在 當(dāng)前數(shù)據(jù)庫(kù)中的菌株。非典型菌株通常只會(huì)報(bào)告“No Identification”。而培養(yǎng)72小時(shí)后SIM低 于0.5的都將報(bào)告為“No Identification ”。
質(zhì)控菌種
當(dāng)用凍干菌株時(shí)，至少要傳兩代，使其恢復(fù)活性， 并調(diào)節(jié)其相應(yīng)的生理狀態(tài)。
鑒定板培養(yǎng)48h，上讀數(shù)儀讀板。如果鑒定結(jié)果不符合，重新看一下操作流程，檢查菌株是否純。
YT微孔板使用固定在微孔板上的94個(gè)不同的生化試驗(yàn)來對(duì)廣泛的酵母菌提供表型概況并 進(jìn)行鑒定。Biolog鑒定系統(tǒng)中的軟件（MicrologTM 3）通過讀取YT微孔板上所表現(xiàn)出的表型圖譜 來對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒定。
概述
1、Biolog YT微孔板通過微生物對(duì)微孔板中的不同碳源的利用及氧化情況進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試 使得有特征代謝的孔變成紫色，從而使微生物在測(cè)試板上顯示出“代謝指紋圖譜 ”1，2。
2、所有必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及生化試劑都被預(yù)先填充、干化在96個(gè)孔中。在一部分孔中 （A-C行），四唑類氧化還原染料通過色度的變化來指示碳源的氧化情況。而剩下的孔（D-H行）則通過濁度的變化來顯示微生物對(duì)碳源的利用情況。
3、試驗(yàn)的操作過程非常簡(jiǎn)單。在平板上按照常規(guī)方法劃線分離需要鑒定的微生物，然后 將分離的到的純種用棉簽挑到無(wú)菌水中，配成指定細(xì)胞濃度的菌懸液。將菌懸液按每 孔100µl的量加到Y(jié)T板后孵育。所有的孔在剛開始的時(shí)候都是無(wú)色的，當(dāng)孵育一段時(shí) 間之后，那些能被細(xì)胞利用的碳源孔中的呼吸作用增強(qiáng)了。增強(qiáng)的呼吸作用導(dǎo)致四唑 氧化還原染料被還原，變成紫色。同時(shí)，能被利用的碳源孔中的微生物也開始生長(zhǎng)， 導(dǎo)致濁度變高。YT板的兩個(gè)陰性對(duì)照孔（A1和D1）中不含碳源。
4、孵育后24，48或者72小時(shí)后，通過YT板上顯紫色及濁度變化所產(chǎn)生的指紋圖譜同 Biolog數(shù)據(jù)庫(kù)中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)。如果找到匹配的，所分離出來的微生物得到鑒定。
注意事項(xiàng)
為獲取準(zhǔn)確且可重復(fù)的結(jié)果，請(qǐng)務(wù)必遵循下列建議：
1、純培養(yǎng)是一切鑒定的前提，
2、使用專用培養(yǎng)基進(jìn)行活化培養(yǎng)非常重要，同一菌株可能會(huì)由于接種前在不同的培養(yǎng)基上生 長(zhǎng)而在鑒定時(shí)產(chǎn)生不同的代謝特征。
3、無(wú)菌操作，避免污染影響結(jié)果。
4、應(yīng)盡量使用一次性玻璃器皿來處理所有細(xì)胞懸液和其他溶液。已經(jīng)清洗過的玻璃器皿可能 含有微量的皂劑或洗滌劑，會(huì)影響到結(jié)果。
5、在使用前將YT微孔板及無(wú)菌水接種液預(yù)熱到室溫。一些菌種對(duì)冷沖擊非常敏感。
6、準(zhǔn)確校正濁度儀，使菌懸液濃度位于指定的濃度范圍。請(qǐng)參考“接種液制備”這一部分內(nèi) 容。
7、YT鑒定板上包被的化學(xué)物質(zhì)對(duì)溫度和光敏感。AN微孔板請(qǐng)置于2-8℃冰箱，避光保存。如 孔顏色為深褐色表示鑒定板碳源已變質(zhì)。一些孔本身就是黃色或淺紅色，這是正常的。
8、請(qǐng)永遠(yuǎn)記住：你正在測(cè)試的是活細(xì)胞的代謝特性。一些菌種在受到應(yīng)激作用（如溫度、pH 及滲透壓變化）時(shí)會(huì)失去代謝活力，哪怕是僅僅幾分鐘。為了從這些微孔板上獲得可接受 的最佳效果，請(qǐng)意識(shí)到這些細(xì)胞是活的，并小心的對(duì)待它們。
9、檢查 YT 鑒定板：
請(qǐng)勿使用過期的 YT 鑒定板。要將其帶著外包裝放于 2-8℃冰箱，避光保存。
試劑及耗材
1、YT MicroPlates YT微孔板: Catalog No.1005 - Biolog YN MicroPlates (10/box).
2、BUY Agar BUA培養(yǎng)基: BUY (Biolog Universal Yeast) Agar (Biolog Catalog #70005).
3、Sterile water 無(wú)菌水接種液: Sterile disposable glass (borosilicate) test tubes, 20ml
capacity (20 x 150mm)，containing 12 to 15 ml of sterile water, pH 5.5-7.0. 自己制備無(wú) 菌水，在無(wú)菌間將其轉(zhuǎn)入Biolog提供的相同的規(guī)格的玻璃管中（20ml容量，20×150mm）， 每管放入12-15ml無(wú)菌水，pH 5.5-7.0.
4、LongSwabsTM 無(wú)菌一次性接種棉簽: Sterile 7-inch disposable cotton-tipped swabs (Biolog Catalog #3021-3023).
5、StreakerzTM木質(zhì)無(wú)菌一次性接種棒: Catalog No.3025- Sterile disposable wooden agar
plate streakers (10x100); Catalog No.3026 (50x20).2、BUY Agar BUA培養(yǎng)基: BUY (Biolog Universal Yeast) Agar (Biolog Catalog #70005).
3、Sterile water 無(wú)菌水接種液: Sterile disposable glass (borosilicate) test tubes, 20ml
capacity (20 x 150mm)，containing 12 to 15 ml of sterile water, pH 5.5-7.0. 自己制備無(wú) 菌水，在無(wú)菌間將其轉(zhuǎn)入Biolog提供的相同的規(guī)格的玻璃管中（20ml容量，20×150mm）， 每管放入12-15ml無(wú)菌水，pH 5.5-7.0.
4、LongSwabsTM 無(wú)菌一次性接種棉簽: Sterile 7-inch disposable cotton-tipped swabs (Biolog Catalog #3021-3023).
5、StreakerzTM木質(zhì)無(wú)菌一次性接種棒: Catalog No.3025- Sterile disposable wooden agar
6、Transfer Pipets無(wú)菌一次性移液管: Catalog No.3019- Sterile disposable 9 inch transfer pipets.
7、Reservoirs無(wú)菌一次性V型加樣槽: Catalog No.3102- Sterile disposable reservoirs.
8、Multichannel Pipettes多道移液器: Catalog No.3711- 8 channel electronic pipettor.
9、Pipet Tips無(wú)菌移液器吸頭: Catalog No. 3201- Sterile racked pipet tips for Ovation multichannel pipettor; Catalog No. 3001- Matrix multichannel pipettor tips.
10、Turbidimeter濁度計(jì): Catalog No.3531- 110 volt model, Catalog No.3532 -220 volt model, Catalog No.3585 - 240 volt model.
11、Turbidity Standards標(biāo)準(zhǔn)比濁管: YT (Biolog Catalog #3415).
12、Incubator 培養(yǎng)箱：26℃ .
操作規(guī)程
做實(shí)驗(yàn)前，先將YT鑒定板和接種液恢復(fù)至室溫25度。
第一步：在Biolog推薦的培養(yǎng)基上培養(yǎng)微生物
n 使用其他培養(yǎng)基分離的到純的培養(yǎng)物。
n 將純化的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)到BUY平板上， 26℃培養(yǎng)。能用YT板鑒定的酵母菌在這個(gè)條件下都可 以生長(zhǎng)。
n 在BUY上培養(yǎng)兩代，然后用第二代的平皿準(zhǔn)備菌懸液。
第二步：樣品準(zhǔn)備
1、使用專用培養(yǎng)基對(duì)分離的菌種進(jìn)行活化培養(yǎng)，選擇培養(yǎng)基非常重要，使用專用的BUY培養(yǎng) 基能使待測(cè)菌株的代謝特征圖譜與數(shù)據(jù)庫(kù)中的圖譜精確的匹配。
2、菌一定要新鮮培養(yǎng)，因穩(wěn)定期的細(xì)胞會(huì)失去活力和代謝活性。對(duì)大多數(shù)酵母菌推薦的培養(yǎng) 時(shí)間為24-48h。
3、如果一些菌生長(zhǎng)不足，所生長(zhǎng)的菌不足以制成特定濃度接種液以接種至鑒定板，則需要接 種時(shí)多接菌到一個(gè)或多個(gè)平板上以得到足夠多的菌，培養(yǎng)24-48h。
第三步：接種準(zhǔn)備
1、在濁度儀上調(diào)節(jié)特定范圍的濁度。首先用空白無(wú)菌水接種液調(diào)至100%，然后利用YT標(biāo)準(zhǔn) 比濁管顯示標(biāo)準(zhǔn)濁度，應(yīng)是47%T，在不同的濁度儀上讀數(shù)可能有些許變化。
2、使用未接種的含有接種液的干凈接種管（擦去管壁污垢及指紋）將濁度儀透光度指針調(diào)100%。由于每只管子在光學(xué)性能上并不完全相同，所以應(yīng)該分別針對(duì)每只接種液來調(diào)空白。
3、接種時(shí)不要將培養(yǎng)基挑進(jìn)接種液，先用棉棒蘸些接種液，蘸取菌后在接種液液體上面管壁上反復(fù)涂使其分散，然后利用接種液將其沖洗下制備成均一接種液。也可利用無(wú)菌吸管混 勻菌液，但應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。如果還有未打散的菌塊，將接種液靜置幾分鐘，使之沉淀下去。n 使用其他培養(yǎng)基分離的到純的培養(yǎng)物。
n 將純化的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)到BUY平板上， 26℃培養(yǎng)。能用YT板鑒定的酵母菌在這個(gè)條件下都可 以生長(zhǎng)。
n 在BUY上培養(yǎng)兩代，然后用第二代的平皿準(zhǔn)備菌懸液。
第二步：樣品準(zhǔn)備
1、使用專用培養(yǎng)基對(duì)分離的菌種進(jìn)行活化培養(yǎng)，選擇培養(yǎng)基非常重要，使用專用的BUY培養(yǎng) 基能使待測(cè)菌株的代謝特征圖譜與數(shù)據(jù)庫(kù)中的圖譜精確的匹配。
2、菌一定要新鮮培養(yǎng)，因穩(wěn)定期的細(xì)胞會(huì)失去活力和代謝活性。對(duì)大多數(shù)酵母菌推薦的培養(yǎng) 時(shí)間為24-48h。
3、如果一些菌生長(zhǎng)不足，所生長(zhǎng)的菌不足以制成特定濃度接種液以接種至鑒定板，則需要接 種時(shí)多接菌到一個(gè)或多個(gè)平板上以得到足夠多的菌，培養(yǎng)24-48h。
第三步：接種準(zhǔn)備
1、在濁度儀上調(diào)節(jié)特定范圍的濁度。首先用空白無(wú)菌水接種液調(diào)至100%，然后利用YT標(biāo)準(zhǔn) 比濁管顯示標(biāo)準(zhǔn)濁度，應(yīng)是47%T，在不同的濁度儀上讀數(shù)可能有些許變化。
2、使用未接種的含有接種液的干凈接種管（擦去管壁污垢及指紋）將濁度儀透光度指針調(diào)100%。由于每只管子在光學(xué)性能上并不完全相同，所以應(yīng)該分別針對(duì)每只接種液來調(diào)空白。
4、準(zhǔn)確調(diào)整菌懸液的菌體濃度到47%T，上下偏差2%。如濃度太高可以加入一些新的接種液， 如濃度太低則繼續(xù)加入更多菌。
5、制備好菌懸液后，菌懸液倒入v型槽，然后迅速接到板上。接菌懸液的過程不超過20min（超 過20min，一些菌會(huì)因失去氮源喪失代謝活力）。
第四步：接種至鑒定板
1、迅速將配制好的菌懸液倒入V型槽中（不要將沉淀倒入），并用移液器將菌懸液接種至YT 板上（每孔100 μl）。
2、接種完后，蓋上微孔板蓋子。
第五步：培養(yǎng)鑒定板
1、將鑒定板置于26℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、注意保持培養(yǎng)環(huán)境的濕度，以減少微孔板中菌液的蒸發(fā)�？梢允褂迷诳擅芊獾乃芰虾兄蟹�
置濕紙巾或砂布，再將微孔板放置其中的方法來保濕。
3、培養(yǎng)鑒定板24，48或者72h，直到微孔板圖譜形成。
結(jié)果
1、培養(yǎng)完畢后請(qǐng)使用MicrologTM 3軟件進(jìn)行結(jié)果獲取，請(qǐng)參見軟件說明書。
2、A1孔作為A-C行的參照孔，D1孔作為D-H行的參照孔。以590nm波長(zhǎng)分別測(cè)試A-C行的顏 色變化，以及D-H行的濁度變化。一般酵母菌鑒定板的圖譜很難用肉眼來判讀。
3、“假陽(yáng)性”是指A1，D1 還有其他本該陰性的孔顯示陽(yáng)性反應(yīng)。（A1孔顯紫色，D1孔產(chǎn)生 濁度變化）�？赡艿脑虬�(xì)胞利用了自身的胞外多糖，儲(chǔ)存的內(nèi)源底物，或細(xì)胞裂解的 物質(zhì)。不正確使用鑒定板也可能產(chǎn)生假陽(yáng)性，請(qǐng)參考“問題解答”部分。一些酵母菌利用 碳源生成帶有顏色的（如褐色）的副產(chǎn)物。這種情況應(yīng)看作“陽(yáng)性”反應(yīng)。
4、對(duì)于YT鑒定板，培養(yǎng)24小時(shí)后，只有當(dāng)相似度指數(shù)（Similarity Index）大于0.75 ，鑒定結(jié) 果才能被接受；而48或72小時(shí)培養(yǎng)后，值大于0.5時(shí)，鑒定結(jié)果才能被接受。
問題解答
如1-9列全是陽(yáng)性，請(qǐng)確認(rèn)：
1、確保該菌株適于用YT鑒定板來鑒定。
2、制作菌懸液時(shí)，確保不要將平板培養(yǎng)基（含氮源）也挑進(jìn)接種液中。
3、菌懸液濃度不要過量，檢查并校正濁度儀。
4、確保菌懸液的均一，不含菌塊。
5、A1，D1孔作為對(duì)照孔，加液時(shí)不要少加，應(yīng)與其它孔一致。
如1-9列全是陰性，請(qǐng)確認(rèn)：
1、確保該菌株適于用 YT 鑒定板來鑒定。
2、需要新鮮培養(yǎng)的酵母菌，使用推薦的培養(yǎng)基BUY。
3、接種液和鑒定板使用前恢復(fù)到室溫，正確制備菌懸液，有合適的pH值和鹽度，不含防腐劑。
4、盡量用一次性的器皿處理細(xì)胞（洗刷過的器皿殘留的皂劑對(duì)細(xì)胞有毒害）。
5、接種液濃度要達(dá)到特定的濁度，檢查并校正濁度儀。
6、用正確的培養(yǎng)溫度進(jìn)行培養(yǎng)。
7、A1，D1孔作為對(duì)照，不要將菌懸液加的過多，與其它孔保持一致。
局限性
YT數(shù)據(jù)庫(kù)的構(gòu)建是通過對(duì)微生物做大量代謝特征驗(yàn)證后得到的。YT板通常只能鑒定包含在 當(dāng)前數(shù)據(jù)庫(kù)中的菌株。非典型菌株通常只會(huì)報(bào)告“No Identification”。而培養(yǎng)72小時(shí)后SIM低 于0.5的都將報(bào)告為“No Identification ”。
質(zhì)控菌種
(Biolog Catalog No.8045).
1 Candida albicans 白色念珠菌（白色假絲酵母） ATCC 10231
2 Candida geochares ATCC 36852
3 Kluyveromyces marxianus 馬克斯克魯維酵母（酵母型）【Candida kefyr 乳酒假絲酵母（菌 絲體型）】 ATCC 2512
4 Galactomyces geotrichum (Geotrichum candidum) ATCC 34614白地霉（菌絲體型）
1 Candida albicans 白色念珠菌（白色假絲酵母） ATCC 10231
2 Candida geochares ATCC 36852
3 Kluyveromyces marxianus 馬克斯克魯維酵母（酵母型）【Candida kefyr 乳酒假絲酵母（菌 絲體型）】 ATCC 2512
4 Galactomyces geotrichum (Geotrichum candidum) ATCC 34614白地霉（菌絲體型）
當(dāng)用凍干菌株時(shí)，至少要傳兩代，使其恢復(fù)活性， 并調(diào)節(jié)其相應(yīng)的生理狀態(tài)。
鑒定板培養(yǎng)48h，上讀數(shù)儀讀板。如果鑒定結(jié)果不符合，重新看一下操作流程，檢查菌株是否純。
標(biāo)簽：
YT；Biolog；鑒定板
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