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根據(jù)孔數(shù)、形狀、處理方式、顏色等綜合選擇合適細(xì)胞培養(yǎng)板的方法

瀏覽次數(shù):1604 發(fā)布日期:2023-10-13  來源:absin

細(xì)胞培養(yǎng)是一種基本的生命科學(xué)研究技術(shù),已成為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究的重要手段。細(xì)胞培養(yǎng)板是細(xì)胞培養(yǎng)實驗中常用和重要的實驗室耗材,選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)板對細(xì)胞的生長和實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性有至關(guān)重要的影響。
 

細(xì)胞培養(yǎng)板根據(jù)底部形狀的不同可分為平底、圓底(U型)和V底(V型);培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等;表面處理方式有TC處理和超低吸附處理;顏色有透明色、白色、黑色等。那么如何從這么多的規(guī)格中選擇適合實驗的細(xì)胞培養(yǎng)板呢?跟小愛去瞅瞅怎么選擇吧。
 

 

一、孔數(shù)的選擇

細(xì)胞培養(yǎng)板的孔數(shù)包含6孔、12孔、24孔、48孔、96孔和384孔。不同孔數(shù)的培養(yǎng)板能培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量不同(見表1),最終的應(yīng)用場景也會不同。如何選擇孔數(shù)主要根據(jù)實驗所需的通量水平以及具體的實驗要求來決定。例如WB、流式檢測相關(guān)實驗,需要較多的細(xì)胞樣本量,最終的檢測通量較低,一般會選擇6孔板、24孔板;又如CTG實驗、CCK8實驗、MTT實驗,實驗通量較高,最終的檢測手段可以實現(xiàn)自動化,多數(shù)可以選擇96孔板或者384孔板。
 

表1 不同類型細(xì)胞培養(yǎng)板通用信息

培養(yǎng)板類型

面積(cm2)

培養(yǎng)液量(mL)

細(xì)胞量

6孔細(xì)胞培養(yǎng)板

9.6

2.5

2.5×106

12細(xì)胞孔培養(yǎng)板

4.5

2.0

106

24細(xì)胞孔培養(yǎng)板

2

1.0

5×105

96細(xì)胞孔培養(yǎng)板

0.32

0.1

105


二、底部形狀的選擇

細(xì)胞培養(yǎng)板根據(jù)底部形狀的不同主要分為平底、圓底(U型)和V底(V型)三大種。平底可用于任何類型細(xì)胞培養(yǎng),是我們?nèi)粘<?xì)胞培養(yǎng)實驗中使用最多的。一般針對特殊實驗需求會用到圓底(U型)和V底(V型)培養(yǎng)板,日常實驗中用的較少。圓底(U型)多用于培養(yǎng)懸浮細(xì)胞,例如免疫學(xué)實驗需要兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時,需要二者相互接觸以刺激,圓底(U型)板可利用重力將細(xì)胞聚集在小范圍內(nèi)。V底(V型)板中細(xì)胞緊密接觸,一般用于細(xì)胞殺傷實驗,可使有效靶細(xì)胞緊密接觸[也可用圓底(U型)板替代,加入細(xì)胞后,低速離心即可]。

 

三、表面處理方式的選擇

細(xì)胞培養(yǎng)板的處理方式主要有TC處理和超低吸附處理。選擇哪種表面處理方式,主要取決于培養(yǎng)的細(xì)胞是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)板一般采用的原材料是聚苯乙烯,這一材料具有疏水性。對于貼壁細(xì)胞而言,需要貼附在親水表面?zhèn)饶苌L。經(jīng)過TC處理的細(xì)胞培養(yǎng)板,表面改性后更適合貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。超低吸附處理是將特殊的兩性分子聚合物鍍膜至培養(yǎng)板表層,可有效抑制細(xì)胞附著,從而滿足懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的需求。因此對于貼壁細(xì)胞可選擇TC處理細(xì)胞培養(yǎng)板,對于懸浮細(xì)胞可選擇超低吸附處理細(xì)胞培養(yǎng)板或者未經(jīng)任何處理的細(xì)胞培養(yǎng)板。

 

四、細(xì)胞培養(yǎng)板顏色的選擇

細(xì)胞培養(yǎng)板的顏色與應(yīng)用息息相關(guān)。細(xì)胞培養(yǎng)板的顏色主要有透明、白色、黑色。如果用相差顯微鏡或肉眼觀察細(xì)胞,可選擇透明的細(xì)胞培養(yǎng)板。對于可見光光譜以外的應(yīng)用(如冷光或熒光),就必須使用有顏色的細(xì)胞培養(yǎng)板(如白色或黑色)的。在使用從頂部讀數(shù)的儀器時,底部應(yīng)該是不透明的,而使用顯微鏡或底部讀數(shù)的儀器時,應(yīng)選擇底部透明的培養(yǎng)板。冷光樣品通常選擇白色表面,以便最大限度提高信號的反射率,而大于300nm的熒光應(yīng)用時通常使用黑色表面,以吸收激發(fā)信號。同時有顏色的表面還可以防止相鄰孔之間的信號串?dāng)_。具體應(yīng)用所采用的不同顏色培養(yǎng)板總結(jié)如下:

1)發(fā)光檢測(冷光)—白色細(xì)胞培養(yǎng)板,以便最大限度提高信號的反射率;
2)熒光檢測(熒光)—黑色細(xì)胞培養(yǎng)板,以吸收激發(fā)信號,可以防止相鄰孔之間的信號串?dāng)_;
3)頂部讀數(shù)—底部不透明的細(xì)胞培養(yǎng)板。

顯微鏡或底部讀數(shù)—底部透明的細(xì)胞培養(yǎng)板。


五、細(xì)胞培養(yǎng)板與酶標(biāo)板的使用辨別

酶標(biāo)板作為固相載體對抗原、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附起著重要作用,可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braford/Lowry),酶活、酶動力學(xué)檢測,酶聯(lián)免疫測定(ELISAs),細(xì)胞增殖與毒性分析,細(xì)胞凋亡檢測(MTT),報告基因檢測及G蛋白偶聯(lián)受體分析(GPCR)等實驗。相比于細(xì)胞培養(yǎng)板,酶標(biāo)板需要盡量降低實驗誤差,制作要求高,價格也相對較高。96孔細(xì)胞培養(yǎng)板和酶標(biāo)板有一定的功能交叉,它們使用上有哪些區(qū)分呢?


1、細(xì)胞培養(yǎng)板可以當(dāng)酶標(biāo)板使用嗎?

當(dāng)測試可見光波長的吸收值時,大多數(shù)96孔板透明板都可以用。但是當(dāng)測試高精度和特殊波長,為避免孔板產(chǎn)生的吸收造成的影響就要用特殊的酶標(biāo)板。


2酶標(biāo)板可以當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)板使用嗎?

酶標(biāo)板沒有進(jìn)行貼壁處理,是不可以用來培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的。


3、測吸光度可以用細(xì)胞培養(yǎng)板嗎?

細(xì)胞培養(yǎng)板可以進(jìn)行吸光度的檢測,經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量等。

來源:愛必信(上海)生物科技有限公司
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