一睹免疫細胞搏殺戰(zhàn)場的風(fēng)采

效應(yīng)細胞功能鑒定和抗體藥物研發(fā)之ADCC分析

（Celigo全視野細胞掃描分析儀）

1.ADCC作用

ADCC作用即抗體依賴細胞介導(dǎo)的細胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)：指表達IgGFc受體的NK細胞、巨噬細胞和中性粒細胞等，通過與已結(jié)合在病毒感染細胞和腫瘤細胞等靶細胞表面的IgG抗體的Fc段結(jié)合，而達到殺傷這些靶細胞的作用。

2.ADCC作用的關(guān)鍵點

1. 效靶比(E:T)：即效應(yīng)細胞和靶細胞的比率，是分析ADCC作用的關(guān)鍵因素之一。
2. 抗體濃度：最佳抗體濃度的摸索是ADCC作用的關(guān)鍵因素；
3. 效應(yīng)時間：最佳效應(yīng)時間點的摸索也是ADCC作用的關(guān)鍵因素

3.檢測方法：

全視野細胞掃描分析儀能多時間點圖像監(jiān)測和定量分析效應(yīng)細胞殺死靶細胞的搏殺戰(zhàn)場。

4.Celigo監(jiān)測實驗流程舉例

1）Calcein AM熒光染料：一種可對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑。

Calcein AM能夠輕易穿透活細胞膜，進入到細胞質(zhì)后，酯酶會將其水解為Calcein(鈣黃綠素)留在細胞內(nèi)，發(fā)出強綠色熒光。因為其細胞毒性低，是最適合作為活細胞的熒光探針。

1. 分析時，活的靶細胞被Calcein標記，發(fā)出強綠色熒光；如果靶細胞死亡或裂解，Calcein釋放出來，綠色熒光不再存在。因此可以通過Calcein AM熒光的變化，分析效應(yīng)細胞對靶細胞的殺傷作用。

1.）ADCC分析流程：

5.Celigo成像

1）  0h靶細胞全孔圖像           綠色熒光圖像                 明場+熒光疊加

2）0h靶細胞計數(shù)圖像（取局部圖像） 

      綠色熒光細胞圖像                  圈定的計數(shù)的細胞圖像

3）不同時間點靶細胞計數(shù)圖像

            0h                 2h                4h             6h

6.ADCC殺傷公式和殺傷曲線

CAM+_t0: 0h的Calcein AM陽性數(shù)           nCAM+_t: t小時的Calcein AM陽性數(shù)

                                              ADCC殺傷曲線

7.基于Celigo圖像的Calcein AM法和LDH釋放法對比

8.不同效靶比(E:T)對ADCC作用的影響

                  10:1                 5:1                  2.5:1

             1.3:1                  0.6:1                0.3:1            

9.不同效應(yīng)時間點搏殺的細胞圖像

10.不同抗體濃度搏殺的細胞圖像

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