高效液相色譜法:
根據(jù)國標(biāo)《GB 5413.37—2010》食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測(cè)定
實(shí)驗(yàn)用前處理:
實(shí)驗(yàn)儀器和好耗材包括:
恒溫水浴鍋 溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml 高速勻質(zhì)器 黃曲霉毒素免疫M(jìn)1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機(jī) 定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管
實(shí)驗(yàn)用試劑:色譜乙腈 色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等
HPLC條件:
高效液相色譜儀 |
|
色譜柱 |
C18柱,150*4.6mm,5um |
流動(dòng)相 |
乙腈-水(25:75) |
熒光檢測(cè)器: |
激發(fā)波長365nm,發(fā)射波長435nm; |
柱 溫 |
室溫 |
流速 |
1.0ml/min |
進(jìn)樣量 |
20ul |
出峰時(shí)間 |
10分鐘左右 |
樣品取樣:真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程,所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。
樣品前處理:不同樣品
牛奶 水浴加熱至40度,離心用上清液過柱凈化;
乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品:稱取適量奶粉樣品,用于蒸餾水中,混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型):稱取適量奶粉樣品,用于蒸餾水中,調(diào)節(jié)PH值至微堿性,高速均質(zhì)器勻漿,水浴加熱后離心,取上清液混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
干酪:稱取適量切細(xì)或粉碎,過篩用加純水溶解,高速均質(zhì)器勻漿,超聲提取后收集上清液,然后用石油醚進(jìn)行兩次萃取,然后用適宜的有機(jī)溶液萃取,取若干上清液過柱凈化
奶粉樣品,用于蒸餾水溶解中,調(diào)節(jié)PH值至微堿性,水浴加熱后離心,取上清液混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
奶油:稱取適量加甲醇水溶解,震蕩后分頁漏斗取下層溶液,蒸干后溶于水用于過柱凈化。
免疫柱凈化步驟:完全符合GB/T 18980-2003
┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復(fù)至室溫,將上方塞子取出斜剪斷,再插回親和柱上。
┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取清澈液注入玻璃注射器;
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;
┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接,在注射器中加入10ml水,調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
┅┅準(zhǔn)確加入4mL色譜級(jí)乙腈洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測(cè)。
注:收集管中的洗脫液即為純化后的樣品,可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測(cè)。
HPLC 檢測(cè)需要儀器與耗材
產(chǎn)品名稱 |
說明 |
黃曲霉毒素M1固體標(biāo)準(zhǔn)品 |
參比對(duì)照使用 |
黃曲霉毒素M1液體標(biāo)準(zhǔn)品 |
濃度0.5ug/ml, 溶于乙腈 |
PriboFast 黃曲霉素M1免疫親和柱 |
用于 樣品前處理柱 分析黃曲霉素 |
PriboFast泵流操作架(8位) |
用于免疫親和柱凈化樣品處理,方便控制流速 |
黃曲霉毒素檢測(cè)專用玻璃纖維濾紙 |
用于去除HPLC檢測(cè)時(shí)部分雜峰,有效提高靈敏度。110,1.5um |
不銹鋼均質(zhì)器 |
高速勻漿樣品,有效提高萃取效率 |
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀-超聲波發(fā)生器等配套設(shè)備 |
|
酶聯(lián)免疫檢測(cè)法:符合國家標(biāo)準(zhǔn)
酶聯(lián)免疫檢測(cè)法采用競爭ELISA,在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原,加入樣本(或黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品溶液)及辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素M1與預(yù)包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時(shí)被除去。再加入TMB顯色液,讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負(fù)相關(guān)。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素M1的含量。
樣品處理
牛奶:直接離心取上清液用于檢測(cè)
奶粉及其他固狀奶制品:需要溶解于去離子水中,離心取上清液用于檢測(cè)
試劑盒檢測(cè)時(shí)間:30分鐘+30分鐘
交叉反應(yīng)率:
Aflatoxin M1 |
100% |
Aflatoxin B1 |
8% |
Aflatoxin B2 |
10% |
Aflatoxin G1 |
7% |
Aflatoxin G2 |
5% |
ELISA 方法檢測(cè)需要:
|
說明 |
PriboFast 黃曲霉毒素M1酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒 |
96T 檢測(cè)范圍 (0.1 ppb -8.1ppb) |
移液器(彩色) |
多個(gè)量程:0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul |
八道半支滅菌移液器 |
量程: 5-50ul; 50-300ul |
酶標(biāo)儀等 |
進(jìn)口、國產(chǎn)儀器, |
PriboFast試劑盒采用直接競爭法,檢測(cè)時(shí)間短,步驟簡單,性能穩(wěn)定,檢測(cè)限符合國標(biāo)要求。
對(duì)分析人員要求:
化學(xué)分析儀器及其相關(guān)專業(yè)或有高效液相色譜儀操作經(jīng)驗(yàn)的人員均可很快掌握黃曲霉毒素M1檢測(cè)技術(shù)。我公司提供相關(guān)的技術(shù)培訓(xùn)和售后技術(shù)服務(wù)。
敬請(qǐng)來電咨詢:
技術(shù)與售后請(qǐng)聯(lián)系:
北京泰樂祺科技有限公司
電話:010-63395349 63380700 52453171 52453170 13311089404
網(wǎng)址:http://www.rapid-bio.com/
E-mail:rapidbio@126.com