外周血單個核細胞（Periphery blood mononuclear cell，PBMC）是外周血中具有單個核的細胞，包括淋巴細胞，單核細胞，漿細胞等（如圖1）。在機體免疫系統(tǒng)中，PBMC細胞扮演著重要角色，不僅參與免疫應答和免疫調節(jié)，還是抗體藥物研發(fā)、感染性疾病、惡性血液疾病、疫苗開發(fā)以及移植免疫等領域的研究原材料。

圖1. PBMC細胞的組成

外周血中，除了PBMC外，還有無核的血小板、成熟的紅細胞、多核的粒細胞等，其體積、形態(tài)和比重均不相同。因此，可用密度梯度離心法將各種細胞與PBMC分離開，如Ficoll密度梯度離心法，離心后比重較大的紅細胞和粒細胞沉于管底，PBMC漂浮于分離液表面（如圖2）。

PBMC的質量非常關鍵，直接決定下游的實驗研究或治療方案如何推進。但是受限于技術方法，分離出來的PBMC難以避免會混有其他細胞，如紅細胞等。因此，對PBMC樣本進行精確的細胞計數(shù)、精準的細胞活率檢測，以確定細胞的質量尤為重要。

PBMC樣本的特殊性：1.樣本通常來自患者，數(shù)量有限，用盡可能少的檢測次數(shù)獲取到最真實的濃度數(shù)據(jù)；2.紅細胞與PBMC大小相近，難以通過肉眼區(qū)分；因此常規(guī)的計數(shù)方法對此類樣本均無法滿足要求。采用血球計數(shù)板的顯微鏡下人工計數(shù)方式，通常計數(shù)幾十個細胞，繼而推斷整個樣本濃度，其計數(shù)體系非常小，影響統(tǒng)計學準確性，同時細胞活率的判定依賴臺盼藍染色，人為主觀因素導致低準確性和低重復性�；�于圖像法的自動細胞計數(shù)儀，通過自動化消除了一些不可靠性，但其原理與依賴圖像的血球計數(shù)方式相同，仍然存在低準確性和低重復性的問題。

為解決這種復雜細胞懸液的計數(shù)問題，需要加大計數(shù)體系，即計數(shù)更多的細胞，并避免對圖像的依賴。美國Orflo Technologies 公司的Moxi系列庫爾特細胞分析系統(tǒng)就是解決這一困難的利器，三個型號設備（Moxi Z，Moxi V和Moxi Go II）均采用細胞計數(shù)和體積測量行業(yè)的金標準——庫爾特原理，同時結合專利的微流控技術，對細胞樣本進行精準計數(shù)和體積測量。Moxi V和Moxi Go II還增加了流式熒光檢測模塊，實現(xiàn)對細胞樣本的熒光活率檢測及常規(guī)流式分析。設備一次運行，可在幾秒內完成數(shù)萬個細胞的計數(shù)及熒光檢測，計數(shù)體系大，不依賴圖像，對細胞樣本進行絕對計數(shù)和三維立體的體積測量，具備更高的準確性和重復性。

如圖3所示，是Moxi庫爾特細胞分析系統(tǒng)進行PBMC計數(shù)的結果，一次計數(shù)18000多個事件，包括細胞和碎片。通過體積門控設置，將<3μm處的碎片峰（紅色框）排除，確保輸出的濃度數(shù)據(jù)中只包括真實的細胞信息。

Moxi V和Moxi Go II在細胞計數(shù)和體積測量的基礎上增加了流式熒光檢測通道，預設有PBMC檢測程序，實現(xiàn)一鍵調用，10秒即可完成細胞計數(shù)、體積檢測及活率檢測，同時可提供紅細胞污染數(shù)據(jù)（圖4）。

 

Moxi 系列產品采用庫爾特原理進行細胞計數(shù)和粒徑測量，其中高端型號配備流式熒光檢測通道，可進行細胞活率、細胞凋亡、轉染效率、活性氧簇、線粒體膜電位等常規(guī)流式檢測。儀器設計小巧輕便，無需預熱，開機即用，預設程序，觸屏操控，運行后10秒即可給出測試結果，使用后也無需清潔維護。無論是經驗豐富的實驗高手，還是初試身手的實驗小白，Moxi系統(tǒng)都可以助您輕松完成實驗。

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