數(shù)字PCR-外泌體相關(guān)腫瘤分子標(biāo)志物篩查
瀏覽次數(shù):2206 發(fā)布日期:2019-12-28
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近幾年外泌體研究的熱度以及文章數(shù)量一直居高不下。人體幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞都能分泌外泌體,它是一種直徑為 30~150 nm 的小囊泡,外泌體廣泛存在并分布于各種體液中,攜帶多種蛋白質(zhì)、RNA成分(編碼RNA、非編碼RNA)和脂類(lèi)物質(zhì)等。外泌體作為重要的傳遞信號(hào)分子,形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),參與免疫應(yīng)答、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、腫瘤侵襲、促血管新生等生理過(guò)程,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。
目前,越來(lái)越多的研究人員將外泌體與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)聯(lián)系起來(lái),特別是在
液體活檢方面,外泌體的研究將會(huì)為疾病的診斷與治療帶來(lái)重大改變。
由于外泌體的來(lái)源、結(jié)構(gòu)和內(nèi)含物等特性,研究人員可以從體液中獲取外泌體作為早期疾病診斷的依據(jù)以及評(píng)估藥物治療效果。外泌體用于液體活檢具有很大優(yōu)勢(shì),一方面,外泌體比CTC或循環(huán)cfDNA能更早診斷出癌癥,CTC和cfDNA只有在癌癥發(fā)展到一定程度后才增多。另一方面,外泌體檢測(cè)還避免了傳統(tǒng)組織活檢對(duì)患者造成的不適及損傷。此外,幾乎所有體液均可作為活檢的生物材料,因此能夠保證外泌體來(lái)源。針對(duì)各種疾病的早期診斷方法將也有望投入實(shí)際應(yīng)用。
在一些分析中,研究人員發(fā)現(xiàn),檢測(cè)體液中的外泌體,能鑒別出實(shí)體瘤特異的蛋白靶點(diǎn),血清中的外泌體也帶有膠質(zhì)母細(xì)胞瘤相關(guān)的miRNA和mRNA突變。此外,通過(guò)分析外泌體miRNA,研究人員找到了肝癌、肺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌等等一系列疾病的標(biāo)志物,如下圖所示。
外泌體miRNA-1247-3p促進(jìn)肝癌肺轉(zhuǎn)移
(Tumor-derived exosomal miR-1247-3p induces cancer-associated fibroblast activation to foster lung metastasis of liver cancer www. Nature communications)。
肺癌相關(guān)外泌體miRNA參與癌癥期間免疫系統(tǒng)的調(diào)控
(The Potential Biomarkers and Immunological Effects of Tumor-Derived Exosomes in Lung Cancer. Front. Immunol.)
在外泌體中尋找腫瘤分子標(biāo)志物,通常的研究思路如下:
在對(duì)篩選得到的差異分子進(jìn)行再次驗(yàn)證時(shí),數(shù)字PCR憑借其一系列優(yōu)勢(shì)獲得了廣泛的認(rèn)可。
數(shù)字PCR可以提供比qPCR更精準(zhǔn)的核酸定量,直接讀取陽(yáng)性信號(hào),通過(guò)泊松分布校正得到目標(biāo)基因的絕對(duì)拷貝數(shù)。并具有檢測(cè)周期短,靈敏度和精確度高等特點(diǎn)。該技術(shù)是目前最適合用于體液樣品(如血液、尿液、糞便、痰液、胸腹水、腦脊液等)中痕量核酸標(biāo)記物檢測(cè)的方法,數(shù)字PCR能夠有效對(duì)二代測(cè)序等實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
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