液體活檢作為一種新興的癌癥診斷和監(jiān)測(cè)技術(shù)，主要樣本類型包括全血、血漿、胸腔積液、腹腔積液、尿液、腦脊液以及唾液等。該技術(shù)在腫瘤的早期篩查、早期診斷、治療監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估等多個(gè)環(huán)節(jié)展現(xiàn)出巨大潛力，有望為腫瘤全周期的診斷和治療提供解決方案。

01 液體活檢現(xiàn)有的挑戰(zhàn)

Fig. 1 液體活檢示例

1.1 需要靈活多樣的檢測(cè)方法
液體活檢技術(shù)能夠提供一系列豐富的生物標(biāo)志物，包括循環(huán)游離DNA（cfDNA）、循環(huán)游離RNA（cfRNA）以及甲基化DNA等，需要靈活多樣的檢測(cè)方法對(duì)這些標(biāo)志物進(jìn)行深入的檢測(cè)與分析。

1.2 需要更高靈敏度
循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）的濃度在不同個(gè)體和腫瘤類型中表現(xiàn)出顯著的差異性，最小等位基因頻率（Minor Allele Frequency, MAF）跨度從0.1%到10%。鑒于這種廣泛的濃度差異，為了準(zhǔn)確捕捉和分析這些微小的遺傳變化，對(duì)檢測(cè)則需要更高的靈敏度。

1.3 需要覆蓋更多的檢測(cè)信息
液體活檢的樣本彌足珍貴，因此在檢測(cè)過程中，希望利用最小的樣本量來盡可能的獲取更豐富的樣本檢測(cè)信息。

02 Crystal Digital PCR^®為液體活檢提供精準(zhǔn)便捷的解決方案

Fig. 2 Crystal Digital PCR^®的工作流程

2.1 讓基因突變檢測(cè)更加簡(jiǎn)單高效
全流程時(shí)間（Total Time of Testing, ToT）僅需3小時(shí)，即可全面覆蓋各類基因突變，檢測(cè)靈敏度達(dá)0.1%。同時(shí)，檢測(cè)方案兼具多重檢測(cè)的高效性和超高性價(jià)比。操作流程簡(jiǎn)潔明了，單一設(shè)備、單一耗材，單次加樣，極大簡(jiǎn)化了檢測(cè)過程。

Fig. 3  Crystal Digital PCR^®基因突變檢測(cè)

2.2 提供兩種檢測(cè)策略滿足不同檢測(cè)需求
針對(duì)大規(guī)模樣本檢測(cè)：例如，在檢測(cè)ESR1基因時(shí)，采用Ruby芯片，能夠?qū)崿F(xiàn)單次檢測(cè)384個(gè)樣本，提供高樣本通量解決方案。

針對(duì)多基因組合檢測(cè)：單個(gè)樣本檢測(cè)，能夠同時(shí)檢測(cè)超過100種基因靶標(biāo)，實(shí)現(xiàn)高效的多重基因檢測(cè)。

Fig. 4  Crystal Digital PCR^®兩種檢測(cè)策略

2.3 對(duì)低濃度、稀有突變有高靈敏檢出(MAF 0.05%)
在常規(guī)條件下，液體活檢樣本的濃度通常為0.5至3ng/ul。測(cè)試樣本濃度分別為0.4ng/ul、0.8ng/ul和1.75ng/ul，對(duì)應(yīng)的最小等位基因頻率（MAF）覆蓋了從0%到2%，包括0.05%、0.1%、0.5%、1%等關(guān)鍵點(diǎn)。無論樣本濃度如何，都能夠?qū)崿F(xiàn)至少0.05%最小等位基因頻率（MAF）高靈敏度檢測(cè)，并且在低濃度樣本中也展現(xiàn)出卓越的重復(fù)性和穩(wěn)定性。

Fig. 5  BRAF,KRAS,NRAS突變檢測(cè)結(jié)果

2.4 Crystal高階多重技術(shù)確保了多重靶標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的一致性
7色熒光*，可實(shí)現(xiàn)單孔高達(dá)21種靶標(biāo)的多重檢測(cè)。結(jié)合軟件的自動(dòng)化分析，有效降低了熒光信號(hào)間的干擾，使得單次檢測(cè)能夠提供更為豐富和精確的信息。

采用熒光多重組合，ESR-1突變檢測(cè)試劑實(shí)現(xiàn)了對(duì)18個(gè)靶標(biāo)（17種ESR-1突變靶標(biāo)和1個(gè)參考基因靶標(biāo)）的高效檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明，與較低多重檢測(cè)方法相比，高階多重檢測(cè)展現(xiàn)了良好的結(jié)果一致性和MAF相關(guān)性。

Fig. 6  ESR-1高階多重檢測(cè)結(jié)果

“所見即所得”——可視化質(zhì)控系統(tǒng)能夠全面追蹤微滴的數(shù)量、分布和體積，軟件自動(dòng)化功能有效識(shí)別并排除假陽性微滴，從而大幅提升檢測(cè)結(jié)果的可信度和可靠性。在三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中，我們以0.05%的變異等位基因頻率（VAF）成功確認(rèn)了Y537N突變的存在。.

Fig. 7 ESR-1 Y537N 0.05%的變異等位基因頻率(VAF)

2.5 與NGS比有更高的靈敏性和精準(zhǔn)性
對(duì)于低MAF的樣本，Crystal Digital PCR^®比下一代測(cè)序（NGS）展現(xiàn)出更高的靈敏性和定量精準(zhǔn)性。

Fig. 8  ESR-1 D538G dPCR對(duì)比NGS檢測(cè)結(jié)果

2.6 Flex探針技術(shù)極大降低熒光串?dāng)_及開發(fā)成本

Fig. 9  通用熒光報(bào)告系統(tǒng)

通用熒光報(bào)告系統(tǒng)由兩部分組成——引物和通用報(bào)告基團(tuán)。與Taqman探針系統(tǒng)相比，通用熒光報(bào)告系統(tǒng)在不同檢測(cè)panel的研發(fā)與生產(chǎn)過程中，無需合成新的探針，從而大幅節(jié)省了研發(fā)和生產(chǎn)成本。

03 Crystal Digital PCR^®系統(tǒng)提供的解決方案及其卓越價(jià)值

• Crystal Digital PCR^®實(shí)現(xiàn)對(duì)低濃度樣本和稀有突變的高靈敏度檢測(cè)。

• Crystal Digital PCR^®的超高通量檢測(cè)最大程度地從珍稀樣本中提取更豐富的樣本信息。

• Crystal Digital PCR^®簡(jiǎn)化的工作流程和最少的操作時(shí)間，顯著降低了實(shí)驗(yàn)的可變性。

• Crystal Digital PCR^®的靈活樣本通量使您能夠選擇合適的技術(shù)，以達(dá)到所需的靈敏度和精準(zhǔn)度。

• 相較于其他技術(shù)或dPCR系統(tǒng)，Crystal Digital PCR^®在液體活檢應(yīng)用中極大的節(jié)約檢測(cè)時(shí)間和成本。