好吧,說什么我都不相信他說的2060年人類就滅絕的事情。不過認(rèn)真地說,如果沒有蜜蜂授粉,地球上的萬物應(yīng)該都會(huì)受到影響吧。難道要靠蒼蠅么?
內(nèi)生孢子又稱芽孢,主要來源于寄生在昆蟲的消化道上皮細(xì)胞中的微孢子蟲,典型的有蜜蜂腸道微孢子蟲和家蠶微孢子蟲。微孢子蟲病感染傳播速度快,易出現(xiàn)群體體質(zhì)衰弱甚至死亡,因此需要對(duì)昆蟲腸道中的內(nèi)生孢子進(jìn)行檢測(cè),以達(dá)到對(duì)微孢子蟲病的防控和判斷最佳治療期。
目前,實(shí)驗(yàn)室對(duì)于蜜蜂腸道內(nèi)生孢子的計(jì)數(shù)只能通過顯微鏡計(jì)數(shù),其過程費(fèi)時(shí)費(fèi)力,且蜜蜂腸道內(nèi)生孢子粒徑較小,僅2
~3μm,不同人員間鏡檢結(jié)果偏差較大,且濃度偏高時(shí)鏡檢尤其困難。
卓微科技定制版JIMBIO CL 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀可替代顯微鏡鏡檢,檢測(cè)濃度范圍為1e5~5e6,能夠提高計(jì)數(shù)效率,給出準(zhǔn)確客觀的計(jì)數(shù)結(jié)果。
下面是整個(gè)蜜蜂腸道內(nèi)生孢子的計(jì)數(shù)案例
材料:
感染微孢子蟲病蜜蜂 、PBS(1X)
孢子懸液純化制備:
1、取蜜蜂的腹部,置于放入蒸餾水及研磨粉的研缽中研磨。
2、研磨均勻后轉(zhuǎn)入10ml離心管中,500rpm低速離心3min。
3、上清轉(zhuǎn)入新的10ml離心管,棄沉淀,2000rpm高速離心10min。
4、棄上清,用清水重新懸浮沉淀,4000rpm離心10min。
5、取沉淀,用1mlPBS溶解沉淀,4℃保存?zhèn)溆谩?br />
顯微鏡鏡檢圖:
結(jié)果與分析:
從圖1、圖2可以看出,蜜蜂腸道內(nèi)生孢子比較小,且濃度較高的時(shí)候,樣本平鋪在血球計(jì)數(shù)板上非常密集,顯微鏡下計(jì)數(shù)困難。
從表1中可以看出,定制版JIMBIO-CL測(cè)試結(jié)果與計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)相比,平均濃度基本一致,由于定制版JIMBIO-CL為10微升樣本全計(jì)數(shù),測(cè)試結(jié)果波動(dòng)較小,穩(wěn)定性明顯優(yōu)于進(jìn)口血球計(jì)數(shù)板。
注意事項(xiàng):
1、只能使用PBS(1X)稀釋待測(cè)蜜蜂孢子樣本;
2、加樣前需充分混勻待測(cè)樣本(可根據(jù)樣本總量選擇不同規(guī)格液槍吹打);
3、為保證檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性,待檢測(cè)樣本總量不要低于100微升。
致謝:
感謝福建農(nóng)林大學(xué)蜂學(xué)院郭睿老師課題組和黃偉峰老師課題組提供樣本,并共同完成應(yīng)用開發(fā)。
歡迎研究蠶寶寶的課題組給我們致電,一起研究蠶寶寶的內(nèi)生孢子。