循環(huán)游離DNA(circulating cell-free DNA,ccfDNA)是人及動(dòng)植物體液中、在細(xì)胞外,處于游離狀態(tài)的DNA 分子。作為一種非入侵性的疾病診斷標(biāo)志物,ccfDNA的檢測(cè)有望替代目前的侵入性方法,在早期實(shí)現(xiàn)疾病的診斷和監(jiān)控。因此ccfDNA在在液體活檢領(lǐng)域掀起一陣新風(fēng)暴。
來(lái)源于腫瘤細(xì)胞的ccfDNA又稱(chēng)為循環(huán)腫瘤DNA(Circulating cell-free DNA,ctDNA)。ctDNA含量與腫瘤進(jìn)展階段密切相關(guān),準(zhǔn)確檢測(cè)ctDNA含量對(duì)腫瘤診斷和治療有十分重要的意義。然而相較于全部ccfDNA,血液里ctDNA的含量很少,表現(xiàn)為非常低的等位基因頻率。因此,通過(guò)PCR和三代測(cè)序的方法檢測(cè)超低濃度的ctDNA時(shí),產(chǎn)生誤差的概率大大增加。全世界的科研工作者就如何降低這類(lèi)誤差做出了許多探索。近日,美國(guó)科學(xué)家借助LightBench全自動(dòng)核酸凝膠電泳成像分析回收系統(tǒng),并將獨(dú)特應(yīng)用發(fā)表了文獻(xiàn)《Automated size selection for short cell-free DNA fragments enriches for circulating tumor DNA and improves error correction during next generation sequencing》。研究指出,通過(guò)提取較短片段的ccfDNA可以提高ctDNA的基因頻率,從而實(shí)現(xiàn)ctDNA的富集并且減少PCR和測(cè)序結(jié)果的誤差。
LightBench能對(duì)每個(gè)泳道電壓獨(dú)立控制,可使得從25bp至基因組大小的目標(biāo)片段同時(shí)到達(dá)回收孔,從而實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)富集回收;贚ightBench的這一功能,研究人員對(duì)黑色素瘤患者的ccfDNA富集回收分析,分離得到了較小片段的ccfDNA,并通過(guò)后續(xù)PCR及測(cè)序證實(shí)了此方法可以準(zhǔn)確且可重復(fù)地分離目標(biāo)片段大小ccfDNA。
接下來(lái),研究人員對(duì)分離得到的較短片段的ccfDNA進(jìn)行研究,對(duì)其中的目標(biāo)ctDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序,檢測(cè)ctDNA含量。結(jié)果顯示,較短片段的ccfDNA亞群中,ctDNA含量相對(duì)較高,實(shí)現(xiàn)了富集。
并且,研究人員對(duì)健康患者富集后的ctDNA和未經(jīng)過(guò)富集的ctDNA進(jìn)行了檢測(cè),并統(tǒng)計(jì)假陽(yáng)性概率。結(jié)果顯示較高的ctDNA含量可以減少結(jié)果的誤差。
綜上所述,基于LightBench全自動(dòng)核酸凝膠電泳成像分析回收系統(tǒng),研究人員分離得到了較短片段的ccfDNA,并實(shí)現(xiàn)了ctDNA的富集。從而降低腫瘤液體活檢過(guò)程中出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果的概率,提高了腫瘤篩查和診斷準(zhǔn)確性,大大提高了將這些研究結(jié)果轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用的潛力。
關(guān)于LightBench全自動(dòng)核酸電泳成像分析回收系統(tǒng)
LightBench全自動(dòng)核酸電泳成像分析回收系統(tǒng),是Coastal Genomics公司研發(fā)的集電泳圖譜分析、片段選擇回收、核酸濃度測(cè)定三大功能于一體的儀器?梢灾p松完成枯燥繁瑣的瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)!
LightBench采用專(zhuān)利的Ranger Technoogy進(jìn)行全自動(dòng)凝膠電泳,每次運(yùn)行可同時(shí)分析96份樣本,純化回收12份樣本,成像范圍從25bp至基因組大小,DNA回收率80%以上。同時(shí)兼容漢密爾頓機(jī)器人液體處理裝置,幫助用戶(hù)提升工作效率,簡(jiǎn)化工作流程,快速實(shí)現(xiàn)高通量核酸分析及核酸片段回收。
普瑞麥迪(北京)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司于2018年5月正式成為Coastal Genomics中國(guó)區(qū)獨(dú)家總代,期待進(jìn)一步推進(jìn)中國(guó)市場(chǎng)核酸研究與檢測(cè)領(lǐng)域的發(fā)展!同時(shí)誠(chéng)邀全國(guó)各區(qū)合作伙伴與我們攜手合作!
LightBench技術(shù)優(yōu)勢(shì):
● 精確的片段長(zhǎng)度分析:25bp-基因組大小
● 低成本的片段全自動(dòng)純化回收
● 高靈敏度檢測(cè):200pg-1000ng;
● 高效率:96 個(gè)DNA片段長(zhǎng)度分析<30min
● 全自動(dòng)樣品追蹤
● 靈活兼容液體處理裝置及核酸定量試劑
LightBench可應(yīng)用于以下應(yīng)用領(lǐng)域
● 三代測(cè)序
● CFDNA富集
● 液體活檢
● 考古等稀有DNA富集
·基因合成
·基因克隆
·基因測(cè)序
·基因分型
·核酸定量分析
·限制性片段長(zhǎng)度分析