講座背景
 

      為了從一個印跡中獲得更多的信息，或者遇到珍貴樣本，人們通常在傳統(tǒng)Western Blot中利用洗脫和重雜交（Stripe & Reprobe）的方式進行蛋白多靶點分析。

      然而，會面臨如下令人頭疼的問題：

• 洗脫次數(shù)不夠，無法充分解離靶點和抗體，影響二次雜交

• 洗脫次數(shù)太多，導致膜上蛋白丟失

• 由于每個靶點和抗體親和力不同，需要不停摸索洗脫條件

   

      進而，導致不可避免的蛋白和信號損失。因此，不能獲得準確的定量數(shù)據(jù)。

      Digital Western Blot （ 即Simple Western ）中的RePlex技術，是一種優(yōu)化且自動化的兩步免疫測定，能夠在不損失信號強度和不影響表位結合的情況下，獲得精確定量、多重蛋白表達的數(shù)據(jù)。

      本次網(wǎng)絡研討會中，來自洛桑大學蛋白質分析部門（PAF）的Lorrain博士，介紹了如何利用RePlex技術，來推進三種特定的、多重的生物檢測項目。她同時也分享了檢測的設計和優(yōu)化，其中一個案例，利用了來自同一物種的兩種抗體，但使用不同檢測通道。以及，比較了幾種常見的管家蛋白與總蛋白歸一化的研究。

      這些研究結果，為如何設計RePlex實驗提供了指導，并體現(xiàn)了RePlex技術在免疫測定時的靈活性、可重復性和精確定量。

• Digital Western Blot工作原理 & 優(yōu)勢

• RePlex技術解析

• RePlex技術應用案例分享，來自洛桑大學：HA-HSP90轉染 （野生型或磷酸化位點突變型）、管家蛋白 VS 總蛋白定量

• RePlex技術總結：

  可量化表達磷酸化靶標和總蛋白水平

  可在同一毛細管中進行總蛋白歸一化檢測

  免疫探針的選擇上有更大的靈活性

  每個樣品可得出更多的數(shù)據(jù)信息

  節(jié)省耗材、珍貴樣品和寶貴時間