血細(xì)胞分析儀的概述及校準(zhǔn)方法
一、血細(xì)胞分析儀概述
自動血細(xì)胞分析儀(blood cell analyzer,BCA)是指對一定體積全血內(nèi)血細(xì)胞異質(zhì)性進(jìn)行自動分析的常規(guī)檢驗儀器。它又稱血細(xì)胞自動計數(shù)儀(automated blood cell counter,ABCC)、血液學(xué)自動分析儀(automated hematology analyzer,AHA)。但ABCC應(yīng)當(dāng)代表的是早期的低檔次的BCA，而AHA外延過大,故多數(shù)學(xué)者稱之—BCA。
20世紀(jì)40年代末，美國庫爾特(W.H.Coulter)先生發(fā)明了電阻抗法微粒子技術(shù)計數(shù)專利,并于1953年開發(fā)研制了世界上第一臺BCA(Coulter Model A型)運(yùn)用于臨床檢驗中。當(dāng)時這種儀器為一個檢測通道，僅能進(jìn)行紅細(xì)胞、白細(xì)胞計數(shù)，故稱ABCC。20世紀(jì)60年代,在原來的基礎(chǔ)上增加了血紅蛋白、紅細(xì)胞平均體積、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度和紅細(xì)胞比容等測定參數(shù)。20世紀(jì)70年代專用的血小板計數(shù)儀問世，但它是將抗凝全血低速離心,分離富含血小板血漿進(jìn)行計數(shù)。不久,隨著計算機(jī)技術(shù)的應(yīng)用, 血小板和紅細(xì)胞可在一個通道一起同時計數(shù)，至此，BCA已能作全血細(xì)胞計數(shù)(Complete blood cell count，CBC)。80年代，雙檢測通道，多參數(shù)BCA相繼研制成功，增加了紅細(xì)胞體積分布寬度、血小板比容及平均體積、白細(xì)胞分類計數(shù)等參數(shù)；白細(xì)胞分類兩分群、三分群、五分群BCA先后投入臨床應(yīng)用。自20世紀(jì)90年代以來，多功能、多參數(shù)BCA不斷產(chǎn)生，BCA由阻抗型的18參數(shù)，發(fā)展至今天的46個參數(shù)之多，誕生了許多非傳統(tǒng)新參數(shù)，概括為以下幾個方面：①新的白細(xì)胞參數(shù)：淋巴細(xì)胞CD4與CD8計數(shù)、平均過氧化物酶活性指數(shù)（mean peroxidase index，MPXI）、異常白細(xì)胞數(shù)量和百分比等。②新的紅細(xì)胞參數(shù)：紅細(xì)胞血紅蛋白含量分布寬度（HDW）、紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量（CH）、紅細(xì)胞內(nèi)平均血紅蛋白含量（CHCM）等。③新的網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)：網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（Retic%）、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)（Retic#）、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（LFR%）、中等熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（MFR%）、高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（HFR%）、網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量（CHr）、平均網(wǎng)織紅細(xì)胞體積（MCVr）、網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量分布寬度（HDWr）、網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)平均血紅蛋白濃度（CHCMr）、網(wǎng)織紅細(xì)胞分布寬度（RDWr）、未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞指數(shù)（IFR）、網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）等。④新的血小板參數(shù)：血小板平均濃度（MPC）、血小板平均質(zhì)量（MPM）等。⑤其他參數(shù)：造血干細(xì)胞、幼稚細(xì)胞有核紅細(xì)胞檢測計數(shù)功能等。
二、血細(xì)胞分析儀的校準(zhǔn)
自動血細(xì)胞儀是臨床實驗室最常用的分析儀器之一，在儀器精密度良好的前提下，正確校準(zhǔn)儀器是保證臨床檢測結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵。為此結(jié)合國內(nèi)實際情況，全國血液學(xué)、體液學(xué)委員會就BCA校準(zhǔn)問題提出如下建議。
（一）校準(zhǔn)的一般要求
1.為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，要求對每一臺BCA進(jìn)行校準(zhǔn)。儀器安裝時必須由廠家進(jìn)行校準(zhǔn)并提供記錄，否則不能用于臨床標(biāo)本的檢測。
2.實驗室須按“建議”的要求建立適合本實驗室使用的BCA校準(zhǔn)程序并寫成文件。內(nèi)容包括：使用校準(zhǔn)物的溯源性、來源、名稱及其保存方法；校準(zhǔn)的具體方法和步驟；何時要求進(jìn)行校準(zhǔn)、由何人負(fù)責(zé)實施等。
3.BCA進(jìn)行校準(zhǔn)后，必須開展室內(nèi)質(zhì)量控制以監(jiān)測儀器的檢測結(jié)果是否發(fā)生漂移。
（二）校準(zhǔn)物
1.校準(zhǔn)物的來源 一是儀器的配套校準(zhǔn)物；二是來自新鮮人血，但定值要求直接或間接地溯源至國際標(biāo)準(zhǔn)。
2.校準(zhǔn)物的選擇 ①使用中國藥品監(jiān)督管理局注冊登記、國際公認(rèn)質(zhì)量可靠的檢測系統(tǒng)的實驗室，應(yīng)選用制造商規(guī)定的配套校準(zhǔn)物。②使用新鮮血作為校準(zhǔn)物但必須強(qiáng)調(diào)其溯源性。③對于使用無配套校準(zhǔn)物檢測系統(tǒng)的實驗室，必須使用新鮮血進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。
3. 質(zhì)控物和校準(zhǔn)物的區(qū)別 ①從理論上講概念不同；②從性質(zhì)上講,校準(zhǔn)物的特性更接近新鮮血；③從定值準(zhǔn)確性來看,兩者有差異，但不顯著；④從作用上看,質(zhì)控物用于常規(guī)工作中,隨被測樣本一起測定,校準(zhǔn)物只有在儀器條件發(fā)生變化而需要校準(zhǔn)時才使用；⑤從使用上看，校準(zhǔn)物必須配套，且配套廠家的校準(zhǔn)物，校準(zhǔn)同一系列、不同型號儀器所用的靶值相近，但不一定完全相同，而質(zhì)控物一般通用，且不同型號BCA間差異較大，在使用時務(wù)必注意；⑥表示方法不同，校準(zhǔn)物測定結(jié)果用偏差表示，質(zhì)控物測定結(jié)果用CV表示。
（三）校準(zhǔn)方法
對使用中國藥品監(jiān)督管理局注冊登記的國際公認(rèn)質(zhì)量可靠的檢測系統(tǒng)的實驗室，在使用制造商規(guī)定的配套校準(zhǔn)物時，嚴(yán)格按儀器說明書規(guī)定的程序進(jìn)行校準(zhǔn)。使用其他檢測系統(tǒng)的實驗室，可用新鮮血按如下方法進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。
1.儀器的準(zhǔn)備 先用清洗劑對血細(xì)胞自動分析儀內(nèi)部各通道及測試室處理30min。確認(rèn)儀器的背景計數(shù)、精密度及攜帶污染率在說明書規(guī)定的范圍內(nèi)時，方可進(jìn)行校準(zhǔn)，否則須查找原因，必要時請維修人員進(jìn)行檢修。
自動血細(xì)胞分析儀(blood cell analyzer,BCA)是指對一定體積全血內(nèi)血細(xì)胞異質(zhì)性進(jìn)行自動分析的常規(guī)檢驗儀器。它又稱血細(xì)胞自動計數(shù)儀(automated blood cell counter,ABCC)、血液學(xué)自動分析儀(automated hematology analyzer,AHA)。但ABCC應(yīng)當(dāng)代表的是早期的低檔次的BCA，而AHA外延過大,故多數(shù)學(xué)者稱之—BCA。
20世紀(jì)40年代末，美國庫爾特(W.H.Coulter)先生發(fā)明了電阻抗法微粒子技術(shù)計數(shù)專利,并于1953年開發(fā)研制了世界上第一臺BCA(Coulter Model A型)運(yùn)用于臨床檢驗中。當(dāng)時這種儀器為一個檢測通道，僅能進(jìn)行紅細(xì)胞、白細(xì)胞計數(shù)，故稱ABCC。20世紀(jì)60年代,在原來的基礎(chǔ)上增加了血紅蛋白、紅細(xì)胞平均體積、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度和紅細(xì)胞比容等測定參數(shù)。20世紀(jì)70年代專用的血小板計數(shù)儀問世，但它是將抗凝全血低速離心,分離富含血小板血漿進(jìn)行計數(shù)。不久,隨著計算機(jī)技術(shù)的應(yīng)用, 血小板和紅細(xì)胞可在一個通道一起同時計數(shù)，至此，BCA已能作全血細(xì)胞計數(shù)(Complete blood cell count，CBC)。80年代，雙檢測通道，多參數(shù)BCA相繼研制成功，增加了紅細(xì)胞體積分布寬度、血小板比容及平均體積、白細(xì)胞分類計數(shù)等參數(shù)；白細(xì)胞分類兩分群、三分群、五分群BCA先后投入臨床應(yīng)用。自20世紀(jì)90年代以來，多功能、多參數(shù)BCA不斷產(chǎn)生，BCA由阻抗型的18參數(shù)，發(fā)展至今天的46個參數(shù)之多，誕生了許多非傳統(tǒng)新參數(shù)，概括為以下幾個方面：①新的白細(xì)胞參數(shù)：淋巴細(xì)胞CD4與CD8計數(shù)、平均過氧化物酶活性指數(shù)（mean peroxidase index，MPXI）、異常白細(xì)胞數(shù)量和百分比等。②新的紅細(xì)胞參數(shù)：紅細(xì)胞血紅蛋白含量分布寬度（HDW）、紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量（CH）、紅細(xì)胞內(nèi)平均血紅蛋白含量（CHCM）等。③新的網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)：網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（Retic%）、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)（Retic#）、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（LFR%）、中等熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（MFR%）、高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（HFR%）、網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量（CHr）、平均網(wǎng)織紅細(xì)胞體積（MCVr）、網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量分布寬度（HDWr）、網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)平均血紅蛋白濃度（CHCMr）、網(wǎng)織紅細(xì)胞分布寬度（RDWr）、未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞指數(shù)（IFR）、網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）等。④新的血小板參數(shù)：血小板平均濃度（MPC）、血小板平均質(zhì)量（MPM）等。⑤其他參數(shù)：造血干細(xì)胞、幼稚細(xì)胞有核紅細(xì)胞檢測計數(shù)功能等。
二、血細(xì)胞分析儀的校準(zhǔn)
自動血細(xì)胞儀是臨床實驗室最常用的分析儀器之一，在儀器精密度良好的前提下，正確校準(zhǔn)儀器是保證臨床檢測結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵。為此結(jié)合國內(nèi)實際情況，全國血液學(xué)、體液學(xué)委員會就BCA校準(zhǔn)問題提出如下建議。
（一）校準(zhǔn)的一般要求
1.為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，要求對每一臺BCA進(jìn)行校準(zhǔn)。儀器安裝時必須由廠家進(jìn)行校準(zhǔn)并提供記錄，否則不能用于臨床標(biāo)本的檢測。
2.實驗室須按“建議”的要求建立適合本實驗室使用的BCA校準(zhǔn)程序并寫成文件。內(nèi)容包括：使用校準(zhǔn)物的溯源性、來源、名稱及其保存方法；校準(zhǔn)的具體方法和步驟；何時要求進(jìn)行校準(zhǔn)、由何人負(fù)責(zé)實施等。
3.BCA進(jìn)行校準(zhǔn)后，必須開展室內(nèi)質(zhì)量控制以監(jiān)測儀器的檢測結(jié)果是否發(fā)生漂移。
（二）校準(zhǔn)物
1.校準(zhǔn)物的來源 一是儀器的配套校準(zhǔn)物；二是來自新鮮人血，但定值要求直接或間接地溯源至國際標(biāo)準(zhǔn)。
2.校準(zhǔn)物的選擇 ①使用中國藥品監(jiān)督管理局注冊登記、國際公認(rèn)質(zhì)量可靠的檢測系統(tǒng)的實驗室，應(yīng)選用制造商規(guī)定的配套校準(zhǔn)物。②使用新鮮血作為校準(zhǔn)物但必須強(qiáng)調(diào)其溯源性。③對于使用無配套校準(zhǔn)物檢測系統(tǒng)的實驗室，必須使用新鮮血進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。
3. 質(zhì)控物和校準(zhǔn)物的區(qū)別 ①從理論上講概念不同；②從性質(zhì)上講,校準(zhǔn)物的特性更接近新鮮血；③從定值準(zhǔn)確性來看,兩者有差異，但不顯著；④從作用上看,質(zhì)控物用于常規(guī)工作中,隨被測樣本一起測定,校準(zhǔn)物只有在儀器條件發(fā)生變化而需要校準(zhǔn)時才使用；⑤從使用上看，校準(zhǔn)物必須配套，且配套廠家的校準(zhǔn)物，校準(zhǔn)同一系列、不同型號儀器所用的靶值相近，但不一定完全相同，而質(zhì)控物一般通用，且不同型號BCA間差異較大，在使用時務(wù)必注意；⑥表示方法不同，校準(zhǔn)物測定結(jié)果用偏差表示，質(zhì)控物測定結(jié)果用CV表示。
（三）校準(zhǔn)方法
對使用中國藥品監(jiān)督管理局注冊登記的國際公認(rèn)質(zhì)量可靠的檢測系統(tǒng)的實驗室，在使用制造商規(guī)定的配套校準(zhǔn)物時，嚴(yán)格按儀器說明書規(guī)定的程序進(jìn)行校準(zhǔn)。使用其他檢測系統(tǒng)的實驗室，可用新鮮血按如下方法進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。
1.儀器的準(zhǔn)備 先用清洗劑對血細(xì)胞自動分析儀內(nèi)部各通道及測試室處理30min。確認(rèn)儀器的背景計數(shù)、精密度及攜帶污染率在說明書規(guī)定的范圍內(nèi)時，方可進(jìn)行校準(zhǔn)，否則須查找原因，必要時請維修人員進(jìn)行檢修。
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貝克曼 COULTER LH 750/LH 755全自動血液分析儀
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