ELISPOT（酶聯(lián)免疫斑點法）技術(shù)簡介
EliSpot（酶聯(lián)免疫斑點法）技術(shù)簡介
酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(Enzyme Linked Immunospot Assay, ELISPOT)是細(xì)胞免疫學(xué)研究中最敏感的檢測方法之一，可以在單細(xì)胞水平對抗體分泌細(xì)胞(ASC)及細(xì)胞因子(CK) 分泌細(xì)胞進(jìn)行檢測。由于是單細(xì)胞水平檢測，ELISPOT比ELISA 和有限稀釋法等具有更高的靈敏性，能從20萬-30萬細(xì)胞中檢出1個分泌該蛋白的細(xì)胞。并且該方法能夠?qū)乖碳ず蟮幕罴?xì)胞進(jìn)行功能性檢測，具有較高的特異性、直觀可信度高，并且易操作，已被廣泛用于分泌CK細(xì)胞檢測或ASC測定中，在國內(nèi)外免疫學(xué)界獲得了廣泛的應(yīng)用。
ELISPOT Principle原理：
細(xì)胞受到刺激后產(chǎn)生細(xì)胞因子，此細(xì)胞因子被ELISPOT板底PVDF膜上的特異單克隆抗體捕獲。除去細(xì)胞后，被捕獲的細(xì)胞因子與生物素標(biāo)記的二抗結(jié)合，其后再與堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素結(jié)合。底物孵育后， PVDF 孔板出現(xiàn)紫色或紅褐色的斑點表明細(xì)胞產(chǎn)生了細(xì)胞因子，通過AID ELISPOT 分析儀（酶聯(lián)斑點分析系統(tǒng)）對斑點的進(jìn)行自動化成像、計數(shù)和分析。
ELISPOT Protocol方法步驟:
為什么選擇ELISPOT assay?
• 高靈敏度：百萬分之一陽性細(xì)胞檢測率, 200x vs ELISA, ~RT-PCR
• 活細(xì)胞功能檢測：檢測到的細(xì)胞因子不是已存在的，而是在檢測過程中，被加入的刺激物刺激而分泌出來的。
• 直觀、可信度高：一個陽性細(xì)胞一個斑點，斑點數(shù)量代表分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞數(shù)量多少，斑點大小代表該細(xì)胞分泌細(xì)胞因子水平的多少
• 經(jīng)過凍存復(fù)蘇的細(xì)胞并不喪失免疫功能：這一點對臨床試驗非常重要，治療前和治療后的樣本可以并排進(jìn)行測試，結(jié)果可以重復(fù)；
• 高通量檢測：科研工作者每天可檢測數(shù)百個樣品；只需少量細(xì)胞如45毫升血液就足以用于測試600種不同抗原/肽類物質(zhì)的反應(yīng)。
在您的免疫學(xué)科研中，ELISPOT作為一種有效的研究工具，可以檢測抗原特異性的T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子或者B細(xì)胞分泌的抗體，從而進(jìn)行T、B細(xì)胞功能研究。如需了解更多有關(guān)ELISPOT實驗和技術(shù)介紹，可以登錄.
