免疫細(xì)胞療法，特別是CAR-T細(xì)胞療法，利用人體免疫系統(tǒng)對(duì)抗疾病，尤其是癌癥。CAR-T細(xì)胞是經(jīng)過(guò)基因修飾的T細(xì)胞，旨在靶向并摧毀癌細(xì)胞。在CAR-T的制造過(guò)程中，EVE™ HT FL等高通量熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀起著至關(guān)重要的作用。它們?cè)u(píng)估細(xì)胞活力、計(jì)數(shù)CAR-T細(xì)胞、確保原材料的質(zhì)量控制、優(yōu)化培養(yǎng)條件、確定最佳收獲時(shí)間、檢測(cè)污染物，并為符合監(jiān)管要求的數(shù)據(jù)記錄提供便利，從而提高CAR-T生產(chǎn)的效率和質(zhì)量。

EVE™ HT FL提高了CAR-T療法的生產(chǎn)效率和質(zhì)量，為這種個(gè)性化免疫療法的成功作出了貢獻(xiàn)。

細(xì)胞療法：組織細(xì)胞療法、免疫細(xì)胞療法和干細(xì)胞療法

細(xì)胞療法包括組織細(xì)胞療法、免疫細(xì)胞療法和干細(xì)胞療法。在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，它們作為獨(dú)立的領(lǐng)域而存在，細(xì)胞療法進(jìn)一步分為組織細(xì)胞療法、免疫細(xì)胞療法和干細(xì)胞療法。另一方面，基因治療被分為免疫細(xì)胞基因治療和干細(xì)胞基因治療。本文將重點(diǎn)討論免疫細(xì)胞療法，特別是CAR-T療法，以及如何在CAR-T生產(chǎn)中應(yīng)用高通量熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，如 EVE™ HT FL。
 

圖1 生物醫(yī)學(xué)分類

什么是免疫細(xì)胞療法？

免疫細(xì)胞療法，也稱為免疫療法，是一種利用身體免疫系統(tǒng)來(lái)對(duì)抗疾病的醫(yī)學(xué)方法，尤其是癌癥和免疫相關(guān)疾病。這種個(gè)性化治療包括從患者體內(nèi)提取免疫細(xì)胞，在實(shí)驗(yàn)室中對(duì)其進(jìn)行基因改造以增強(qiáng)其靶向能力，然后將它們重新引入患者的血液中。其應(yīng)用擴(kuò)展到新藥開(kāi)發(fā)、毒理學(xué)檢測(cè)和生物標(biāo)志物研究。其中一個(gè)典型的例子就是CAR-T細(xì)胞療法，即通過(guò)工程改造使T細(xì)胞專門(mén)靶向并摧毀癌細(xì)胞。免疫細(xì)胞療法提供針對(duì)個(gè)體免疫狀況量身定制的精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)，并已在某些癌癥中顯示出顯著的療效，為治療以前具有挑戰(zhàn)性的疾病開(kāi)辟了新的可能性。當(dāng)前的研究旨在擴(kuò)大其適用性并優(yōu)化安全性和有效性。
 

圖2 CAR-T細(xì)胞療法

 

什么是CAR-T細(xì)胞？
CAR-T細(xì)胞是經(jīng)過(guò)基因修飾以產(chǎn)生人工T細(xì)胞受體的T細(xì)胞。這種創(chuàng)新的免疫療法旨在增強(qiáng)T細(xì)胞識(shí)別和消除癌細(xì)胞的能力。該過(guò)程包括從個(gè)體中提取T細(xì)胞，對(duì)其進(jìn)行基因改變，然后將工程化的CAR-T細(xì)胞重新引入患者體內(nèi)，以更有效地靶向和摧毀腫瘤。這些CAR-T細(xì)胞既可以來(lái)自患者自身的血液(自體)，也可以來(lái)自健康供者的T細(xì)胞(同種異體)。為了確保安全，CAR-T細(xì)胞旨在特異性識(shí)別存在于腫瘤上但不識(shí)別健康細(xì)胞上的抗原。
 

圖3 CAR-T細(xì)胞療法

EVE™ HT FL：CAR-T產(chǎn)品的高效、準(zhǔn)確和高通量解決方案
當(dāng)處理PBMC或T細(xì)胞等細(xì)胞時(shí)，準(zhǔn)確評(píng)估細(xì)胞濃度和活力對(duì)于在后續(xù)操作中保持質(zhì)量至關(guān)重要。由于紅細(xì)胞和非細(xì)胞碎片等常見(jiàn)污染物，這類樣品中的細(xì)胞計(jì)數(shù)成為一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)，引入了耗時(shí)、主觀性和更高的錯(cuò)誤可能性等復(fù)雜性。
 

圖4 EVE™ HT FL

 

當(dāng)處理PBMC或T細(xì)胞等細(xì)胞時(shí)，準(zhǔn)確評(píng)估細(xì)胞濃度和活力對(duì)于保持后續(xù)程序的質(zhì)量至關(guān)重要。由于紅細(xì)胞和非細(xì)胞碎片等常見(jiàn)污染物，這類樣品中的細(xì)胞計(jì)數(shù)成為一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)，引入了時(shí)間消耗、主觀性和更高的錯(cuò)誤可能性等復(fù)雜性。
 

EVE™ HT FL是一款高通量自動(dòng)熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，配備明場(chǎng)和兩個(gè)熒光通道（AO/DAPI）。
 

AO和DAPI是熒光染料，可對(duì)靶細(xì)胞的細(xì)胞核進(jìn)行染色。AO是一種可滲透的染料，無(wú)論細(xì)胞狀況如何，都可以對(duì)所有細(xì)胞的細(xì)胞核進(jìn)行染色。DAPI是一種不滲透性染料，僅對(duì)膜受損的非活性細(xì)胞的細(xì)胞核進(jìn)行染色。
 

圖5 EVE™ HT FL的基本計(jì)數(shù)原理

 

為了準(zhǔn)確評(píng)估PBMC或干細(xì)胞等細(xì)胞類型的活力，建議使用雙熒光染色。該方法可有效排除樣品中的無(wú)核細(xì)胞（例如紅細(xì)胞）、血小板和碎片。在短短3分鐘內(nèi)，可對(duì)多達(dá)48個(gè)樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)和分析。
 

EVE™ HT FL如何應(yīng)用于CAR-T的制造過(guò)程？
當(dāng)處理PBMC或T細(xì)胞等細(xì)胞時(shí)，準(zhǔn)確評(píng)估細(xì)胞濃度和活力對(duì)于保持后續(xù)程序的質(zhì)量至關(guān)重要。由于紅細(xì)胞和非細(xì)胞等常見(jiàn)污染物，這些樣品中的細(xì)胞計(jì)數(shù)成為一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。

 
1. 細(xì)胞活力評(píng)估

EVE™ HT FL是一款高通量熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，能夠快速準(zhǔn)確地測(cè)定活CAR-T細(xì)胞的百分比，即實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力。此外，它還可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。在CAR-T生產(chǎn)中通常需要大量T細(xì)胞，這種能力對(duì)于確保最終CAR-T產(chǎn)品的整體質(zhì)量至關(guān)重要。通過(guò)跟蹤這些參數(shù)，研究人員可以優(yōu)化培養(yǎng)條件，以確保產(chǎn)生足夠數(shù)量的活CAR-T細(xì)胞。

 
2. CAR-T細(xì)胞計(jì)數(shù)

EVE™ HT FL簡(jiǎn)化了CAR-T細(xì)胞的計(jì)數(shù)過(guò)程。通過(guò)自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)，它擅長(zhǎng)計(jì)數(shù)總細(xì)胞計(jì)數(shù)，包括活細(xì)胞和非活細(xì)胞，進(jìn)一步促進(jìn)了細(xì)胞濃度的測(cè)定。這允許在制造過(guò)程的各個(gè)階段準(zhǔn)確接種細(xì)胞。這對(duì)于保持所需的細(xì)胞密度和優(yōu)化下游工藝至關(guān)重要。

 
3. 起始材料的質(zhì)量控制

CAR-T療法的成功在很大程度上取決于起始T細(xì)胞群的質(zhì)量。EVE™ HT FL有助于全面評(píng)估細(xì)胞形態(tài)、大小和整體質(zhì)量。確保起始T細(xì)胞符合預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于一致和有效的CAR-T生產(chǎn)至關(guān)重要。

 
4. 優(yōu)化培養(yǎng)條件

對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物的持續(xù)監(jiān)測(cè)有助于深入了解不同培養(yǎng)條件對(duì)CAR-T細(xì)胞生長(zhǎng)和健康的影響。研究人員可以使用這些信息來(lái)優(yōu)化培養(yǎng)基組成、孵育參數(shù)和其他變量，從而提高CAR-T細(xì)胞的生產(chǎn)效率。

 
5. 確定最佳收獲時(shí)間

EVE™ HT FL有助于確定CAR-T細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間。通過(guò)在培養(yǎng)期間監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力，研究人員可以確定細(xì)胞表現(xiàn)出最大活力且最適合收獲的時(shí)間點(diǎn)，從而優(yōu)化整體生產(chǎn)時(shí)間表。

 
6. 檢測(cè)污染物或異常

AO/DAPI染色可以突出顯示細(xì)胞群中的污染物或異常�？梢钥焖僮R(shí)別細(xì)胞形態(tài)的偏差或不需要的細(xì)胞類型的存在，從而可以采取糾正措施來(lái)保持CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的純度。

 
結(jié)論

EVE™ HT FL可以應(yīng)用于CAR-T生產(chǎn)，提供評(píng)估細(xì)胞活力、計(jì)數(shù)細(xì)胞計(jì)數(shù)、監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)和確保CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品整體質(zhì)量的功能。其高通量特性有助于提高生產(chǎn)過(guò)程的效率和成功，最終影響CAR-T細(xì)胞療法的治療效果。