脫鹽換液首選填料:Bestdex G-25系列葡聚糖凝膠的介紹及應(yīng)用案例
瀏覽次數(shù):516 發(fā)布日期:2024-9-20
來源:博格隆微信公眾號(hào)
背景介紹
凝膠層析原理簡(jiǎn)介
說到分子篩,大家肯定都不陌生。分子篩又叫做凝膠過濾層析、空間排阻色譜等,是應(yīng)用蛋白質(zhì)分子量或分子形狀的差異去進(jìn)行分離的一項(xiàng)蛋白純化技術(shù)。通俗地說,該技術(shù)就是像篩子一樣,將分子依據(jù)“高矮胖瘦”進(jìn)行分離。
這項(xiàng)技術(shù)使用的填料,是一類多孔性天然來源的聚合物材料。在層析過程中,直徑大于凝膠網(wǎng)孔的生物分子,只能沿凝膠顆粒間的空隙隨溶劑流動(dòng),流程短,移動(dòng)速度快,首先被洗脫;中等大小的分子,可以在凝膠顆粒內(nèi)外分布,部分進(jìn)入顆粒,因此在大分子物質(zhì)和小分子物質(zhì)之間被洗脫;直徑小于凝膠凝膠網(wǎng)孔的生物分子,可以自由進(jìn)出網(wǎng)孔,移動(dòng)速率慢而最后被洗脫。
Fig. 1 凝膠層析原理圖
凝膠過濾層析的應(yīng)用
凝膠過濾主要應(yīng)用于兩類分離領(lǐng)域:
• 組分分離(脫鹽/換液):上樣量可達(dá)柱體積的30%。
• 精細(xì)分離(分離不同大小分子量的生物分子):上樣體積為0.5%~4%,柱床高度通常高于60cm。
Bestdex G-25系列凝膠過濾介質(zhì)
博格隆Bestdex G-25系列產(chǎn)品是以葡聚糖為基架材料制成的凝膠過濾介質(zhì),具有親水、多孔的特性。
根據(jù)顆粒大小,博格隆Bestdex G-25系列推出了四種類型的產(chǎn)品:Bestdex G-25 C(Coarse,粗)、Bestdex G-25 M(Medium,中)、Bestdex G-25 F(Fine,細(xì))、Bestdex G-25 SF(Superfine,超細(xì))。
Bestdex G-25系列凝膠過濾介質(zhì)技術(shù)參數(shù)
+顆粒大小呈正態(tài)分布,在該范圍內(nèi)的顆粒占總數(shù)的80%以上
++不同溶液中顆粒大小會(huì)有差異,本數(shù)據(jù)為在PBS中顆粒大小
+++BXK26/70,柱高60cm,壓力0.3MPa測(cè)得
Fig. 2 博格隆Bestdex G-25系列
Bestdex G-25系列產(chǎn)品的主要特點(diǎn)
• 非吸附層析:靠分子量大小差異實(shí)現(xiàn)分離,無吸附與解吸附過程,樣品回收率高。
• 操作條件溫和:能夠在相當(dāng)廣的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行操作。
• 僅需一種緩沖液:全程僅需一種緩沖液即可完成實(shí)驗(yàn),操作簡(jiǎn)單。
Bestdex G-25系列產(chǎn)品的應(yīng)用領(lǐng)域
Bestdex G-25系列凝膠過濾介質(zhì)通過分子篩效應(yīng),實(shí)現(xiàn)樣品的分離純化。常用于蛋白質(zhì)、多糖、核酸等生物樣品的緩沖液置換、脫鹽和去除小分子物質(zhì),也可以用于多肽、寡核苷酸的分離純化,以及抗生素、化學(xué)合成藥物、天然產(chǎn)物的分離純化,還可用于化工中納米材料的提純以及環(huán)保領(lǐng)域的污水處理等領(lǐng)域。
實(shí)際應(yīng)用案例——緩沖液置換
• 層析柱:EzFast 5mL G-25 F x 2
• 平衡液:0.2M NaHCO3、0.5M NaCl,pH8.3
• 上樣體積:1.9mL
Fig. 3 Bestdex G-25 凝膠層析圖譜
使用Tips
由于介質(zhì)是以干粉的方式提供的,所以需要先溶脹,然后裝填層析柱后使用。
一般選用水相緩沖液,緩沖液的pH和電導(dǎo)對(duì)于分離的效果影響不大,主要考慮樣品在緩沖液中的穩(wěn)定性。
以推薦的流速運(yùn)行,柱高越大流速越慢。
為防止樣品堵塞柱子,在上樣前樣品需要用0.45μm的微孔濾膜過濾,若目的物和雜質(zhì)差別比較小,上樣體積按照柱體積的1%~5%上樣;若目的物和要去除的雜質(zhì)差別比較大(如去除樣品中的無機(jī)鹽或緩沖液交換),上樣體積按照柱體積的10%~25%上樣。