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使用活細(xì)胞成像儀檢測細(xì)胞倍增時(shí)間

瀏覽次數(shù):695 發(fā)布日期:2024-8-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
摘要:
    細(xì)胞倍增時(shí)間是指細(xì)胞群體從初始數(shù)量翻倍所需的時(shí)間。這個(gè)指標(biāo)在細(xì)胞生物學(xué)和細(xì)胞治療領(lǐng)域非常重要,因?yàn)樗梢詭椭u估細(xì)胞的生長速率和健康狀況。 
 
正文: 
    在細(xì)胞生物學(xué)與細(xì)胞治療的廣闊領(lǐng)域,細(xì)胞倍增時(shí)間如同一把鑰匙,解鎖著細(xì)胞生長速率與健康狀態(tài)的奧秘。
 
定義:細(xì)胞倍增時(shí)間是指細(xì)胞群體從初始數(shù)量翻倍所需的時(shí)間。它是衡量細(xì)胞增殖能力的重要參數(shù)。
影響因素:細(xì)胞倍增時(shí)間受到多種因素的影響,包括細(xì)胞類型、培養(yǎng)條件、營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)、環(huán)境因素(如溫度、pH值)、細(xì)胞外基質(zhì)等。
測量方法:細(xì)胞倍增時(shí)間可以通過多種方法測量,包括細(xì)胞計(jì)數(shù)、DNA含量測量等。
①細(xì)胞計(jì)數(shù)法:
優(yōu)點(diǎn):操作簡單,直觀。
缺點(diǎn):可能會(huì)受到人為誤差的影響,不適合大量細(xì)胞的計(jì)數(shù)。
②細(xì)胞生長曲線法:
優(yōu)點(diǎn):通過繪制細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間變化的曲線,可以準(zhǔn)確測量倍增時(shí)間。
缺點(diǎn):需要多次取樣和計(jì)數(shù),耗時(shí)較長。
③DNA含量測量:
優(yōu)點(diǎn):可以通過測量DNA含量來估算細(xì)胞數(shù)量。
缺點(diǎn):需要特定的染色劑和設(shè)備,可能受到細(xì)胞周期階段的影響。
④細(xì)胞增殖測定試劑盒:
優(yōu)點(diǎn):操作簡便,靈敏度高,如MTT、BrdU等。
缺點(diǎn):某些試劑可能對細(xì)胞有毒性或受到細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件的限制。
⑤基于圖像的分析:
優(yōu)點(diǎn):可以提供細(xì)胞形態(tài)和分布的詳細(xì)信息。
缺點(diǎn):需要圖像處理軟件和分析技能,可能受到圖像質(zhì)量的影響。
⑥流式細(xì)胞儀分析:
優(yōu)點(diǎn):可以同時(shí)測量多種細(xì)胞特性,如細(xì)胞大小、復(fù)雜性等。
缺點(diǎn):需要專門的設(shè)備和技術(shù),可能受到細(xì)胞碎片的干擾。
 
 
    以上是常用的幾種方式,而今天呢,本文推薦一個(gè)新方法:使用活細(xì)胞成像儀聯(lián)合一個(gè)在線工具(https://www.doubling-time.com/compute_more.php)用來計(jì)算細(xì)胞倍增時(shí)間。
優(yōu)點(diǎn):無需頻繁計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量,無需手動(dòng)繪制生長曲線,自動(dòng)化程度高,僅需依靠成像設(shè)備的掃描與分析軟件便可得到客觀的融合度結(jié)果,極大的減少人為誤差以及節(jié)省研究時(shí)間。

圖1. 新方法示例圖
 

以下則為一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的示例。
 
細(xì)胞系:Hela細(xì)胞
處理因素:不同濃度的抗癌藥物Nocodazole(6.625 nM、31.25 nM、62.5 nM、125 nM、250 nM)
成像設(shè)備:Celloger® Mini Plus(4X,GFP)
實(shí)驗(yàn)耗材:48孔板
細(xì)胞鋪板量:1×104個(gè)/孔
熒光染料:CellTox
總拍攝時(shí)長:48H
間隔拍攝時(shí)長:1H
結(jié)果:用不同濃度的Nocodazole處理細(xì)胞并進(jìn)行延時(shí)成像,細(xì)胞形態(tài)呈濃度依賴性變化,在明場視野下觀察到細(xì)胞融合度減小,細(xì)胞生長曲線圖也呈現(xiàn)同樣的趨勢。
因?yàn)楦邼舛忍幚斫M細(xì)胞逐漸死亡,后續(xù)不再計(jì)算高濃度處理組細(xì)胞的倍增時(shí)間。
未處理組與低濃度處理組的倍增時(shí)間分別為:
Drug Concentration(nM) 0nM 31.25nM
Time(h) 36.11 40.06
 
 

圖2. 各濃度Nocodazole的明場與熒光視野圖像
(圖像顯示以24h為間隔時(shí)間,綠色熒光表示死亡細(xì)胞。比例尺,200 μm)
 

圖3. 細(xì)胞隨時(shí)間變化的融合率(%)數(shù)據(jù)圖
 

圖4. 使用在線工具計(jì)算倍增時(shí)間過程
 
    告別繁瑣的細(xì)胞計(jì)數(shù),告別耗時(shí)的傳統(tǒng)方法,我們的新方法采用先進(jìn)的智能圖像捕獲與分析技術(shù),通過追蹤細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)胞融合度變化,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞倍增時(shí)間的快速、精準(zhǔn)檢測。這不僅大大提升了科研效率,更確保了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性,為科研工作者提供了前所未有的便利。希望以上的分享能對大家計(jì)算倍增時(shí)間提供幫助。
來源:Curiosis Inc.
聯(lián)系電話:18118128515
E-mail:yuanyaling@kaltec.cn

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