多糖結合疫苗的純化
多糖結合疫苗是一類將多糖與蛋白質載體結合起來預防性疫苗。單純的莢膜多糖疫苗不能誘導產生免疫記憶抗體，但將多糖與載體蛋白結合后可誘導產生記憶性抗體，有效提高疫苗的免疫原性。尤其是對于2歲以下的嬰幼兒，因為他們的免疫系統(tǒng)尚未完全成熟，對多糖疫苗的反應較弱。此類疫苗主要用于預防由具有多糖莢膜的細菌引起的疾病，如b型流感嗜血桿菌（Hib）、肺炎鏈球菌和腦膜炎奈瑟菌等。結合疫苗的多糖部分通常來自病原體的多糖，具有高度的種屬特異性，載體蛋白部分通常選擇具有強免疫原性的蛋白質，如破傷風類毒素、白喉類毒素或其突變體CRM197等。
以肺炎多糖結合疫苗為例，肺炎鏈球菌是人類致病率及死亡率極高的致病菌之一，嚴重威脅人類的生命健康。它是一類革蘭染色陽性致病菌，首次分離于1881年。肺炎鏈球菌表面黏液層化學成分為多糖的莢膜，是肺炎鏈球菌主要的致病物質，具有抗原性，根據(jù)其結構特異性可將肺炎鏈球菌分為90多個血清型，其中10種最常見的血清型（1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F）導致了全球62%相關的侵襲性疾病。2000年由輝瑞公司研制的Prevenar成為首個上市的7價肺炎結合疫苗，由7種血清型的莢膜多糖（血清型 4、6B、9V、14、18C、19F、23F）與白喉類毒素突變體 CRM197 共價結合制成。目前，多糖結合疫苗，特別是13價肺炎球菌多糖結合疫苗（PCV13），在中國市場上已有幾款產品成功上市，打破了進口疫苗的壟斷地位。
直接結合法是利用肺炎鏈球菌莢膜多糖表面固有的官能團與蛋白載體表面的官能團進行共價偶聯(lián)，多糖表面豐富的官能團為與蛋白的直接結合提供了便利。還原胺化法是典型的直接結合法，肺炎鏈球菌莢膜多糖表面的鄰位羥基經(jīng)水解或強氧化劑（如高碘酸鈉）氧化后形成末端醛基，可與蛋白表面的氨基形成席夫堿結構，在還原劑（如氰基硼氫化鈉）存在下轉化為較為穩(wěn)定的C-N 結構結合物。
「間接結合法」
間接結合法是利用鏈接劑將肺炎鏈球菌莢膜多糖與載體蛋白進行共價結合的方法，該方法可降低空間屏蔽作用，從而影響結合物的免疫原性。目前，比較常用的連接劑是己二酰肼，兩端的-NH2 可在碳二亞胺存在時分別與多糖上的氰酸酯基（表面羥基經(jīng)溴化氰或CDAP活化后獲得）和載體蛋白的羧基反應鍵合。
肺炎多糖結合疫苗工藝流程
「多糖純化」
將收獲的上游發(fā)酵液，進行超速離心或進行深層過濾，除去大的菌體碎片與可溶性雜質。隨后采用超濾與MMA/IEX層析處理，進行換液與濃縮并除去HCD與HCP，最終完成多糖的制備。
百林科MaXtar® MMA 多模式填料為高流速改良瓊脂糖基架層析介質，由多個不同性質的基團組成：氨基、氫鍵和疏水基團。
款型包括：MaXtar® MMA多模式填料；MaXtar® MMA HR 多模式填料。
百林科MaXtar® MMA 多模式填料在肺炎多糖純化中可實現(xiàn)高回收率并且質量合格的工藝替換。
「結合純化」
將多糖進行水解、活化、衍生、超濾后與蛋白載體通過直接或間接法結合。多糖與蛋白穩(wěn)定結合后，再經(jīng)過超濾與SEC/CHT層析工藝最終完成肺炎多糖結合疫苗的下游純化。
結合疫苗不論在多糖純化階段還是結合后純化階段都要大量采用超濾工藝進行換液與除雜，以期除去HCD與HCP亦或是游離的多糖及蛋白，以及活化與結合時引入的氧化劑或還原劑。百林科FiltraLinX® 桌面手動盒式膜超濾系統(tǒng)可對超濾工藝全流程監(jiān)控，實現(xiàn)0.1-2.5m2不同過濾面積需求，是實驗室小試，中試，及部分品種GMP階段的理想選擇。
多糖結合疫苗純化后期面對難以去除雜質，通常采用SEC/CHT層析手段。
Chromstar® 4FF/6FF 是高度交聯(lián)（4%/6%）的瓊脂糖基架凝膠過濾層析介質。
BARONHAP™ 羥基磷灰石層析介質：
無機純相層析介質，結構穩(wěn)定，兼具陽離子交換、鈣金屬親和、羥基等多種分離模式，款型包括：BARONHAP™ type I ；BARONHAP™ type II。
多糖結合疫苗血清型眾多例如PCV13，PCV23。為防止各血清型之間交叉污染可采用百林科BioHub® 一次性灌裝系統(tǒng)防止交叉污染。
BioHub® 一次性灌裝系統(tǒng)是一種預先滅菌的，且隨時可以使用的一次性灌裝方式，包含一次性攪拌袋、無菌儲液袋、灌裝袋、一次性囊式過濾器、灌裝管路、一次性無菌連接器、斷開器和一次性灌裝針等組件。百林科為客戶提供高質量的耗材以及服務和支持，以最大限度地降低客戶的風險。
以肺炎多糖結合疫苗為例，肺炎鏈球菌是人類致病率及死亡率極高的致病菌之一，嚴重威脅人類的生命健康。它是一類革蘭染色陽性致病菌，首次分離于1881年。肺炎鏈球菌表面黏液層化學成分為多糖的莢膜，是肺炎鏈球菌主要的致病物質，具有抗原性，根據(jù)其結構特異性可將肺炎鏈球菌分為90多個血清型，其中10種最常見的血清型（1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F）導致了全球62%相關的侵襲性疾病。2000年由輝瑞公司研制的Prevenar成為首個上市的7價肺炎結合疫苗，由7種血清型的莢膜多糖（血清型 4、6B、9V、14、18C、19F、23F）與白喉類毒素突變體 CRM197 共價結合制成。目前，多糖結合疫苗，特別是13價肺炎球菌多糖結合疫苗（PCV13），在中國市場上已有幾款產品成功上市，打破了進口疫苗的壟斷地位。
肺炎結合疫苗的結合方法
「直接結合法」直接結合法是利用肺炎鏈球菌莢膜多糖表面固有的官能團與蛋白載體表面的官能團進行共價偶聯(lián)，多糖表面豐富的官能團為與蛋白的直接結合提供了便利。還原胺化法是典型的直接結合法，肺炎鏈球菌莢膜多糖表面的鄰位羥基經(jīng)水解或強氧化劑（如高碘酸鈉）氧化后形成末端醛基，可與蛋白表面的氨基形成席夫堿結構，在還原劑（如氰基硼氫化鈉）存在下轉化為較為穩(wěn)定的C-N 結構結合物。
「間接結合法」
間接結合法是利用鏈接劑將肺炎鏈球菌莢膜多糖與載體蛋白進行共價結合的方法，該方法可降低空間屏蔽作用，從而影響結合物的免疫原性。目前，比較常用的連接劑是己二酰肼，兩端的-NH2 可在碳二亞胺存在時分別與多糖上的氰酸酯基（表面羥基經(jīng)溴化氰或CDAP活化后獲得）和載體蛋白的羧基反應鍵合。
多糖結合疫苗純化工藝
肺炎多糖結合疫苗工藝流程「多糖純化」
將收獲的上游發(fā)酵液，進行超速離心或進行深層過濾，除去大的菌體碎片與可溶性雜質。隨后采用超濾與MMA/IEX層析處理，進行換液與濃縮并除去HCD與HCP，最終完成多糖的制備。
百林科MaXtar® MMA 多模式填料為高流速改良瓊脂糖基架層析介質，由多個不同性質的基團組成：氨基、氫鍵和疏水基團。
款型包括：MaXtar® MMA多模式填料；MaXtar® MMA HR 多模式填料。
- 高流速改良瓊脂糖基架層析介質
- 耐受范圍廣，化學穩(wěn)定性好
- 由多個不同性質的基團組成：氨基、氫鍵和疏水基團
百林科MaXtar® MMA 多模式填料在肺炎多糖純化中可實現(xiàn)高回收率并且質量合格的工藝替換。
「結合純化」將多糖進行水解、活化、衍生、超濾后與蛋白載體通過直接或間接法結合。多糖與蛋白穩(wěn)定結合后，再經(jīng)過超濾與SEC/CHT層析工藝最終完成肺炎多糖結合疫苗的下游純化。
結合疫苗不論在多糖純化階段還是結合后純化階段都要大量采用超濾工藝進行換液與除雜，以期除去HCD與HCP亦或是游離的多糖及蛋白，以及活化與結合時引入的氧化劑或還原劑。百林科FiltraLinX® 桌面手動盒式膜超濾系統(tǒng)可對超濾工藝全流程監(jiān)控，實現(xiàn)0.1-2.5m2不同過濾面積需求，是實驗室小試，中試，及部分品種GMP階段的理想選擇。
多糖結合疫苗純化后期面對難以去除雜質，通常采用SEC/CHT層析手段。
Chromstar® 4FF/6FF 是高度交聯(lián)（4%/6%）的瓊脂糖基架凝膠過濾層析介質。
- 高流速瓊脂糖基架層析介質
- 非特異性吸附低，化學穩(wěn)定性好
- 適用于多糖、重組蛋白、病毒等大分子物質分離
BARONHAP™ 羥基磷灰石層析介質：無機純相層析介質，結構穩(wěn)定，兼具陽離子交換、鈣金屬親和、羥基等多種分離模式，款型包括：BARONHAP™ type I ；BARONHAP™ type II。
- 獨特的分離特性
- 增加了使用壽命
- 高動態(tài)結合載量
- 良好的批次重復性
- 無機純相層析介質，結構穩(wěn)定
- 兼具陽離子交換、鈣金屬親和、羥基等多種分離模式
多糖結合疫苗血清型眾多例如PCV13，PCV23。為防止各血清型之間交叉污染可采用百林科BioHub® 一次性灌裝系統(tǒng)防止交叉污染。
BioHub® 一次性灌裝系統(tǒng)是一種預先滅菌的，且隨時可以使用的一次性灌裝方式，包含一次性攪拌袋、無菌儲液袋、灌裝袋、一次性囊式過濾器、灌裝管路、一次性無菌連接器、斷開器和一次性灌裝針等組件。百林科為客戶提供高質量的耗材以及服務和支持，以最大限度地降低客戶的風險。
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