隨著現(xiàn)代家庭中寵物貓數(shù)量崛起，帶來了空前繁榮的“貓經(jīng)濟(jì)”，數(shù)據(jù)顯示，2022年寵物貓數(shù)量增加至6536萬只，未來還會持續(xù)增長。與此同時貓傳染病的預(yù)防與防疫顯的尤為重要。

其中貓杯狀病毒病、貓病毒性鼻氣管炎、貓泛白細(xì)胞減少癥是貓的重要傳染病，可導(dǎo)致貓呼吸道和腸道等疾病發(fā)生，會造成貓的跋行、流產(chǎn)、慢性胃腸炎等，嚴(yán)重的情況下，甚至導(dǎo)致死亡。

疫苗則是預(yù)防這些疾病最好的方式，針對這三種疾病的疫苗已有上市產(chǎn)品在售。

貓三聯(lián)疫苗一般是指可以同時預(yù)防皰疹病毒，杯狀病毒，貓泛白細(xì)胞減少病毒(貓瘟）的三合一滅活疫苗，也就是一種疫苗可以對抗三種病毒；已上市產(chǎn)品-碩騰的妙三多，從推薦的免疫程序上，需要打四針。具體免疫程序可見下面。
目前國內(nèi)外的企業(yè)在貓三聯(lián)疫苗的開發(fā)上均有顯著的進(jìn)展，以下是“貓三聯(lián)”疫苗的開發(fā)進(jìn)度。其中已有多家動物疫苗單位與百林科在下游的工藝開發(fā)和生產(chǎn)中有合作。


以下簡單列舉貓三聯(lián)疫苗的一些典型工藝路線：


 
其中制備貓三聯(lián)常用的細(xì)胞系為貓腎細(xì)胞F81或者CRFK細(xì)胞，屬于貼壁培養(yǎng)型細(xì)胞，經(jīng)過培養(yǎng)的病毒進(jìn)行相應(yīng)的下游澄清過濾以及超濾等方式進(jìn)行初純，其次用層析法進(jìn)一步降低目標(biāo)物中的雜質(zhì)殘留，如HCP，HCD等進(jìn)一步減少副反應(yīng)。

常見的貓瘟病毒普遍在18nm以上，可以通過專門為病毒或者大分子設(shè)計的一款復(fù)合模式層析填料MaXtar^® COLL400 流穿模式進(jìn)行有效的純化，該方法操作條件靈活，工藝相對容易重復(fù)和執(zhí)行，且不需要過多的參數(shù)摸索，目前有多款人用疫苗和獸用疫苗使用類似的復(fù)合模式填料進(jìn)行了商業(yè)化生產(chǎn)。

MaXtar^® COLL 400 在貓三聯(lián)疫苗純化中的應(yīng)用（不同流速的影響研究）：

• 柱子信息：16*16.7cm  CV:33.4ml
• Buffer:20mM PB+0.1M Nacl pH 6.5

分別采用330cm/h,150cm/h,60cm/h 的流速進(jìn)行上樣。

 
結(jié)論：此三次實(shí)驗(yàn)分別采用330cm/h,150cm/h,60cm/h 的流速進(jìn)行上樣，回收率均達(dá)到預(yù)期，MaXtar^® COLL 400 在低流速情況下同樣能保證回收率，并在100L規(guī)模放大生產(chǎn)中達(dá)到預(yù)期結(jié)果。

MaXtar^® COLL 400/700產(chǎn)品簡介：
獨(dú)特的雙層結(jié)構(gòu)設(shè)計，外殼是多孔的鈍化層 ，確保 400 KD或700 KD 以上的大分子不會進(jìn)孔，直接走外水流穿；核心是偶聯(lián)了同時具有疏水和吸附負(fù)電荷作用基團(tuán)的球形內(nèi)核，最大程度結(jié)合宿主蛋白、 核酸等雜質(zhì)。具有明顯優(yōu)勢：

• 以流穿模式處理400 KD 或700 KD 以上的大分子，工藝優(yōu)化更容易，更方便線性放大。
• 改良的MaXtar^® 基架具有更強(qiáng)剛性，因此在較低的反壓下能夠?qū)崿F(xiàn)更高工藝流速，提高工藝效率。
• 相比于傳統(tǒng)的凝膠過濾層析，擁有更大的上樣量，更高流速，生產(chǎn)效率大大提升。
• 耐受范圍廣，化學(xué)穩(wěn)定性好。
• 適用于病毒及類病毒顆粒等生物大分子分離。

 
MaXtar^® COLL 400/700應(yīng)用過程中的Tips：
為最大程度發(fā)揮COLL系列內(nèi)部的多種配基吸雜效果，建議在緩沖液中添加100~150mM NaCl。
◆ 由于雜質(zhì)與內(nèi)部配基之間的高效多模式結(jié)合，需要對填料進(jìn)行有效清潔，建議使用1M NaOH, 30%異丙醇。
◆ 不推薦使用檸檬酸鹽緩沖液，因?yàn)闄幟仕犭x子會與配基相互作用。
   

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