Phase.1 局限
  免疫細胞亞群檢測面臨窘境  

人體免疫系統(tǒng)在抵御外來侵害，監(jiān)視異常細胞，維持機體內環(huán)境穩(wěn)定中扮演著至關重要的角色�；�于這一核心功能，免疫細胞亞群檢測在評估機體免疫狀態(tài)，輔助篩查和評價多種良惡性疾病及其并發(fā)癥，以及健康管理等方面，也都發(fā)揮著不可或缺的作用。

多參數(shù)流式細胞術（multi-parameter flow cytometry，MFC）是免疫細胞亞群檢測，評估免疫功能的關鍵技術。然而，隨著近年來臨床對疾病監(jiān)測需求的增加，傳統(tǒng)的TBNK檢測——僅檢測T、B、NK細胞的比例和絕對數(shù)，由于檢測細胞群體少，功能評估簡單，所能反映的免疫細胞信息并不全面，其臨床應用的實際效果與預期相差甚遠。

Phase.2 破局
精細化分析免疫細胞亞群共識發(fā)布

為了應對這一挑戰(zhàn)，2023年發(fā)布了《基于多參數(shù)流式細胞術精細化分析外周血免疫細胞亞群的中國專家共識》^【1】（以下簡稱“共識”），為免疫細胞功能檢測領域帶來了重大的概念更新和擴展：

共識建議將原先的T、B、NK淋巴細胞、單核/巨噬細胞、粒細胞等常見免疫細胞，以及使用不同標志物組合進一步檢測的特征性和功能性常見基礎細胞亞群重新定義為“外周血基礎免疫細胞亞群”；^【2】

同時，建議在傳統(tǒng)TBNK免疫細胞亞群的基礎上，增加調節(jié)性T細胞（Treg）、樹突狀細胞（DC）等各類免疫細胞，以及檢測其分化發(fā)育、功能性和活化狀態(tài)相關標志物，并進一步分類出來的免疫細胞亞群，定義為“精細化分析外周血免疫細胞亞群”。^【3-5】

多參數(shù)精細化分析免疫細胞亞群為臨床檢測增加了更多參數(shù)，獲得了更多細胞亞群的信息，在淋巴瘤、腫瘤前驅病變篩查，部分遺傳和免疫缺陷性疾病診斷，良惡性疾病的發(fā)生、發(fā)展及預后評估，免疫治療和造血干細胞抑制免疫重建中，均發(fā)揮了極其重要的作用。

Phase.3 前行
層浪流式&精細化免疫細胞亞群8色方案

共識9^【1】提出，精細化分析免疫細胞亞群建議由8色MFC管完成，其精細化程度與方案根據(jù)臨床應用需求選擇。可以采用多管8色及以上方案或一管超多色方案，精細化亞群比例分別為占上一層亞群的比例。我們依照共識建議的8色多管組合方案中的方案1（表2），使用層浪LongCyte^TM臨床型流式細胞儀進行了精細化免疫細胞亞群8色分析，結果如下：

1. T細胞管

設門策略：

依次設置單個細胞門（single），活細胞門（live），live門內設置T細胞（T cell）門。T cell門內設置CD4+T（T4）、CD8+T（T8）、CD4+CD8+T細胞（DP）細胞門。T、T4、T8細胞中分別CD28+、CD28-細胞群。T、T4、T8、DP中分別設置HLA-DR+CD38^-（DR+38-）、HLA-DR-CD38+（DR-38+）、HLA-DR+CD38+（DR+38+）、HLA-DR-CD38-（DR-38-）細胞群。T8中設置初始 T 細胞（TN ）、中央記憶T 細胞（TCM）、效應記憶T 細胞（TEM）、終末分化效應記憶T細胞（TEMRA）亞群。

2. Treg/Th細胞管

設門策略：

依次設置單個細胞門（single）、活細胞門（live）、T細胞門（T cell）、CD4+T細胞門（T4）、調節(jié)性T細胞門（Treg），T4、Treg中分析初始 T 細胞（TN ）、中央記憶T 細胞（TCM）、效應記憶T 細胞（TEM）、終末分化效應記憶T細胞（TEMRA）。T4、TCM、TEM中進一步分析輔助性T細胞（Th）亞群。

3. DC/單核/NK管

設門策略：

依次設置單個細胞門（single）、活細胞門（live）、T細胞門（T cell）、αβT細胞門（αβT）、γδT細胞門（γδT）、NK細胞門，αβT細胞中設置CD8⁺T細胞（αβT T8）和TRBC1⁺細胞門（αβT  TRBC1⁺），γδT細胞中設置TCR Vδ2陽性細胞門（γδT Vδ2）。分析上述各群細胞的CD57⁺、CD279⁺、CD57⁺CD279⁺細胞群，分析γδT和TCRVδ2細胞的CD56⁺、CD56⁺CD57⁺細胞群。

4. TCR管

設門策略：

依次設置單個細胞門（single）、活細胞門（live）、單個核細胞門（PBMC）、非T非B細胞門（CD3^-CD19^-），非T非B細胞門內設置NK、單核細胞（monocyte）、系別陰性（lin^-）細胞門，NK細胞門內設置CD56和CD16組合表達亞群，單核細胞門內設置經(jīng)典單核細胞（Mo1）、中間單核細胞（Mo2）、非經(jīng)典單核細胞（Mo3）亞群，lin-細胞門內設置樹突狀細胞門（DC），DC內區(qū)分漿樣樹突狀細胞（pDC）和髓樣樹突狀細胞（mDC）。

5. B細胞管

設門策略：

依次設置單個細胞門（single）、活細胞門（live）、單個核細胞門（PBMC）、B 細胞門（B cell）、漿細胞（plasma cell）門 ，B細胞門內設置 CD27^-B 細胞門、記憶性B細胞門（memory B）、CD5⁺B細胞門，分析B和CD5⁺B 細胞門內kappa、lambda表達，CD27^-B細胞內分析初始B前細胞（pre naiveB）和過渡階段B細胞（transitional B），memory B中分析漿母細胞 （plasmablast）。

使用儀器

層浪生物LongCyte^TM3光14色流式細胞儀  

 

參考文獻：

【1】基于多參數(shù)流式細胞術精細化分析外周血免疫細胞亞群的中國專家共識.中華預防醫(yī)學雜志 2023 年11 月第 57 卷第 11 期

【2】中華人民共和國衛(wèi)生部. WS/T 3602011流式細胞術檢測外周血淋巴細胞亞群指南[S].北京:中國標準出版社,2011.

【3】Paul F Ruhle,Rainer Fietkau,etal.Development of a Modular Assay for Detailed Immunophenotyping of Peripheral Human Whole Blood Samples by Multicolor Flow Cytometry.Int J Mol Sci.2016 Aug 11;17(8):1316.doi: 10.3390/ijms17081316.

【4】Greg Finak,Marc Langweiler,etal.Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project. Nat Rev Immunol.2012 Feb 17;12(3):191-200. doi: 10.1038/nri3158.

【5】Oras A,Quirant Sanchez B,etal.Comprehensive flow cytometric reference intervals ofleukocyte subsets from six study centers across Europe.Clin Exp Immunol. 2020 Dec;202(3):363-378.doi: 10.1111/cei.13491.

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