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熒光細(xì)胞成像觀察方法分享

瀏覽次數(shù):849 發(fā)布日期:2024-3-5  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
活細(xì)胞熒光成像通常在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果,該方法步驟繁瑣,只能觀察最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果,那么有什么新方法可以彌補(bǔ)這種不足呢?
 
本文將介紹一種新方法——使用活細(xì)胞成像分析系統(tǒng),置于培養(yǎng)箱內(nèi)實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)成像,監(jiān)測(cè)細(xì)胞熒光變化情況。我們分析了使用活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)的方法對(duì)比常用方法的優(yōu)勢(shì),同時(shí)列舉了幾篇活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)應(yīng)用在細(xì)胞熒光成像方向的高分文章,新方法獲得了科研人員的認(rèn)可,在熒光成像實(shí)驗(yàn)中被廣泛使用。
 
細(xì)胞是生命活動(dòng)的基本結(jié)構(gòu)和功能單位,對(duì)活細(xì)胞中特定生物組分進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析,將為相關(guān)生命活動(dòng)過(guò)程的研究提供重要信息。
 
熒光成像是基于熒光顯微鏡的一種分子成像技術(shù),可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞微觀動(dòng)態(tài)分子過(guò)程,具有直觀、無(wú)損、高靈敏度、高分辨率等顯著優(yōu)點(diǎn)。研究者通過(guò)熒光成像可觀察細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化過(guò)程并隨時(shí)間追蹤細(xì)胞生物分子和結(jié)構(gòu),更好觀察細(xì)胞凋亡、傷口愈合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、免疫細(xì)胞殺傷、神經(jīng)突生長(zhǎng)等過(guò)程。

傷口愈合結(jié)果圖(GFP&RFP表達(dá))

熒光成像技術(shù)是觀察和分析離子以及氨基酸和蛋白質(zhì)等生物大分子定位和動(dòng)態(tài)的強(qiáng)大工具。熒光蛋白(FPs)經(jīng)常被用作熒光指示劑,功能性FPs可以通過(guò)引入編碼融合蛋白的基因與目標(biāo)蛋白或多肽一起表達(dá)出來(lái)。熒光成像試劑除了熒光蛋白外,還可以選擇熒光探針或者熒光染液。
 
傳統(tǒng)的活細(xì)胞熒光成像觀察,將消化下來(lái)的細(xì)胞接種培養(yǎng)至合適密度后,加入熒光染料共同孵育一段時(shí)間后更換新的培養(yǎng)基,在熒光顯微鏡下觀察成像結(jié)果。人工在顯微鏡下拍攝熒光圖像,無(wú)法監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)全過(guò)程,獲得分析數(shù)據(jù)有限,且頻繁取出細(xì)胞樣本耗時(shí)耗力,改變了細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境。
 
那么有什么新工具可以彌補(bǔ)這些不足,助力于活細(xì)胞熒光成像實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?br />  
奎克泰生物的JuLI™系列實(shí)時(shí)活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)能夠?yàn)榛罴?xì)胞熒光成像實(shí)驗(yàn)提供所需要的工具。JuLI™系列設(shè)備操作簡(jiǎn)單,無(wú)需復(fù)雜人工操作,省時(shí)省力;無(wú)需頻繁取出樣本觀察,提供穩(wěn)定的生長(zhǎng)環(huán)境;實(shí)時(shí)觀察,延時(shí)記錄,全面呈現(xiàn)類器官培養(yǎng)情況,獲取大量數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。JuLI™ FL配備GFP/RFP熒光通道,JuLI™ Stage配備GFP、RFP與DAPI三色熒光通道,可實(shí)時(shí)熒光成像和延時(shí)拍攝,基于圖像軟件,可檢測(cè)熒光強(qiáng)度。


JuLI™ FL雙色熒光通道圖


JuLI™ Stage三色熒光通道圖

研究者可以預(yù)先設(shè)定好拍攝參數(shù),通過(guò)延時(shí)攝影監(jiān)測(cè)并評(píng)估細(xì)胞熒光成像情況,提供細(xì)胞熒光強(qiáng)度量化結(jié)果。對(duì)比常規(guī)細(xì)胞熒光成像檢測(cè)方法,活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)大大縮減了人工操作的繁瑣性、提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、成功率,省時(shí)省力,為研究人員帶來(lái)了便利。
 
以下來(lái)自世界各地知名機(jī)構(gòu)發(fā)布的幾篇文章,均為使用JuLI™系列活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)做的細(xì)胞熒光成像實(shí)驗(yàn)。
 
  • 韓國(guó)首爾大學(xué)獸醫(yī)科學(xué)研究所生物化學(xué)系的研究人員在《Experimental & Molecular Medicine》期刊發(fā)表題為 ''Coronary stents with inducible VEGF/HGF-secreting UCB-MSCs reduced restenosis and increased re-endothelialization in a swine model ''的文章。研究人員將分泌HGF和VEGF的人臍帶血源性間充質(zhì)干細(xì)胞(U-Ms)接種到預(yù)涂覆材料片上,以確認(rèn)細(xì)胞在支架材料上的生存能力。用JuLI™ FL檢測(cè)并記錄綠色熒光染料染色的細(xì)胞,數(shù)據(jù)表明Dox能夠增強(qiáng)分泌HGF和VEGF的U-Ms細(xì)胞增殖。

細(xì)胞增殖結(jié)果

 
  • 來(lái)自墨爾本大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)和Bio21分子科學(xué)與生物技術(shù)研究所的研究人員聯(lián)合在《Molecular & Cellular Proteomics》發(fā)表的題為 ''Arginine in C9ORF72 Dipolypeptides Mediates Promiscuous Proteome Binding and Multiple Modes of Toxicity' 的文章。研究人員研究富含精酸的DPR引起的疾病毒性的新機(jī)制。Neuro-2a細(xì)胞與單個(gè)GFP標(biāo)記的DPR和mCherry載體共轉(zhuǎn)染24小時(shí)后更換培養(yǎng)基,然后使用JuLI™ Stage活細(xì)胞成像系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行縱向成像,每間隔15min拍攝一次,共記錄96h。

Neuro-2a細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果
 
  • 來(lái)自韓國(guó)國(guó)立癌癥中心免疫治療科的研究人員在《Nature Communications》發(fā)表題為 'Desensitized chimeric antigen receptor T cells selectively recognize target cells with enhanced antigen expression' 的文章,研究人員應(yīng)用了細(xì)胞凋亡試劑盒,使用JuLI™ Stage測(cè)定EBV LCLs細(xì)胞凋亡動(dòng)力學(xué)。研究表明CD19 CAR T和MVR CAR T細(xì)胞逐漸增加了EBV LCLs細(xì)胞凋亡比例。每5min拍攝一次DAPI和RFP熒光圖像,持續(xù)記錄90min。

EBV LCLs細(xì)胞凋亡檢測(cè)
 

參考文獻(xiàn):
[1]Chang HK, Kim PH, Kim DW, Cho HM, Jeong MJ, Kim DH, Joung YK, Lim KS, Kim HB, Lim HC, Han DK, Hong YJ, Cho JY. Coronary stents with inducible VEGF/HGF-secreting UCB-MSCs reduced restenosis and increased re-endothelialization in a swine model. Exp Mol Med. 2018 Sep 3;50(9):1-14. (IF12.8)
[2]Radwan M, Ang CS, Ormsby AR, Cox D, Daly JC, Reid GE, Hatters DM. Arginine in C9ORF72 Dipolypeptides Mediates Promiscuous Proteome Binding and Multiple Modes of Toxicity. Mol Cell Proteomics. 2020 Apr;19(4):640-654.(IF7)
[3]Han C, Sim SJ, Kim SH, Singh R, Hwang S, Kim YI, Park SH, Kim KH, Lee DG, Oh HS, Lee S, Kim YH, Choi BK, Kwon BS. Desensitized chimeric antigen receptor T cells selectively recognize target cells with enhanced antigen expression. Nat Commun. 2018 Feb 1;9(1):468.(IF16.6)
來(lái)源:蘇州奎克泰生物技術(shù)有限公司
聯(lián)系電話:18551209891
E-mail:lipeipei9891@quictek.com

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