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浙大醫(yī)學(xué)院腦科學(xué)及腦醫(yī)學(xué)院以優(yōu)化的“Apogee納米流式測(cè)試”以檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞外泌體為帕金森病病變和診斷作研究

浙大醫(yī)學(xué)院腦科學(xué)及腦醫(yī)學(xué)院以優(yōu)化的“Apogee納米流式測(cè)試”以檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞外泌體為帕金森病病變和診斷作研究

α-突觸核蛋白（α-syn）的積累是帕金森病 (Parkinson’s Disease, 簡(jiǎn)稱PD) 發(fā)育和進(jìn)展的重要步驟，不僅在神經(jīng)元中觀察到，而且在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（包括星形膠質(zhì)細(xì)胞）中也觀察到。調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞α-syn水平和聚集的機(jī)制尚不清楚。最近，科研人員已經(jīng)證明α-syn的一部分?jǐn)U散是通過(guò)細(xì)胞外囊泡（EV）發(fā)生，盡管目前尚不清楚在PD病變中星形膠質(zhì)細(xì)胞是否參與這過(guò)程。然而，眾所周知，源自中樞神經(jīng)系統(tǒng)的EV存在于血液中，并被廣泛探索為PD和其他神經(jīng)退行性疾病的生物標(biāo)志物。 

在這文章中, 浙大醫(yī)學(xué)院腦科學(xué)及腦醫(yī)學(xué)院利用了Apogee納米流式儀去檢測(cè)PD病人， 多系統(tǒng)萎縮癥 （Multiple System Atrophy， 簡(jiǎn)稱MSA）病人和健康對(duì)照組(Healthy Control, 簡(jiǎn)稱HC)的血清樣本中的星形膠質(zhì)細(xì)胞衍生的EVs（AEV）水平，以研究AEVs作為診斷PD的生物標(biāo)志物。研究人員把這優(yōu)化好的檢測(cè)方法稱為“Apogee assays”。

首先，研究人員先證明“Apogee Assays”針對(duì)檢測(cè)血清中的AEV的特異性和穩(wěn)定性。在這次檢測(cè)中， 研究人員利用GLT-1 (glutamate transporter 1)，總α-syn （SYN211)和聚集體α-syn (MJFR14)作為檢測(cè)AEV的標(biāo)志物。GLT-1標(biāo)志物會(huì)以Alexa Fluor 405熒光標(biāo)志，從結(jié)果中可以看見(jiàn)GLT-1+的EVs可清楚于血清中檢測(cè)出來(lái)，而IgG對(duì)照組只有很少量可檢測(cè)出來(lái)(Fig.1a, d)。而SYN211和MJFR14則以Alex Fluor 488標(biāo)志，檢測(cè)結(jié)果也顯示可在血清中可以明顯地檢測(cè)出來(lái)，而且比IgG對(duì)照組高出很多 (Fig. 1b, c, e, f)。同時(shí)，結(jié)果也證明GLT-1+，SYN211+和MJFR14+在EV耗盡的血清中的水平明顯地降低了很多 (Fig. 1a-f)，這證明了“Apogee Assays”方法的特異性。最后，研究人員把GLT1，SYN211和MJFR14三個(gè)標(biāo)志物的抗體進(jìn)行不同濃度的稀釋 (Fig. 1g-i)和孵育時(shí)間的改變進(jìn)行測(cè)試，說(shuō)明“Apogee Assays”的方法也有很好的穩(wěn)定性 (Fig. 1j-l)。

Fig. 1

研究人員利用“Apogee Assays”并對(duì)106個(gè)PD病人樣本，47 MSA病人樣本和103個(gè)HC樣本進(jìn)行檢測(cè)。從臨床樣本檢測(cè)的結(jié)果中，GLT-1+、SYN211+、和MJFR14+在PD病人樣本中的水平都比HC和MSA的樣本為高。針對(duì)樣本中帶有總α-syn的AEV (GLT-1+/SYN211+)的水平，PD樣本明顯地比MSA樣本和HC樣本為高。而帶有聚集體α-syn的AEV (GLT-1+/MJFR14+)的水平，在PD和MSA樣本中也是明顯地比HC為高 (Fig. 2)。

Fig.2

文章在最后的總結(jié)中，指出利用“Apogee Assays”去檢測(cè)血清中的帶有α-syn的AEV水平，可以作為診斷PD的一個(gè)有用的生物標(biāo)志檢測(cè)方法。

英國(guó)Apogee超靈敏納米流式分析儀，專為外泌體微囊泡（EVs）等小顆粒分析優(yōu)化設(shè)計(jì)，在EVs樣品顆粒大小分析，絕對(duì)定量，多標(biāo)記物同時(shí)快速分析工作中廣泛應(yīng)用。截止目前，該設(shè)備已累計(jì)參與數(shù)百篇高質(zhì)量同行審議文章相關(guān)實(shí)驗(yàn)分析工作。其出色的靈敏度，穩(wěn)定性及可靠性已備受業(yè)內(nèi)廣泛認(rèn)可，并將繼續(xù)為EVs相關(guān)基礎(chǔ)研究及轉(zhuǎn)化應(yīng)用提供堅(jiān)實(shí)支持。

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