熒光素酶報告基因

報告基因（Reporter Gene）：通常指可編碼某種蛋白或酶，其表達產(chǎn)物容易被檢測，并且能與內(nèi)源性背景蛋白相區(qū)別的基因，通過它的表達產(chǎn)物來標定目的基因的表達調(diào)控。
 

二，理想的報告基因必須具備哪些條件？

1.編碼的表達產(chǎn)物必須與細胞內(nèi)源性的所有基因相區(qū)別，編碼產(chǎn)物的活性不受宿主細胞的干預(yù)。

2.有快速簡便、經(jīng)濟、靈敏的檢測方法，且重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠，測量數(shù)據(jù)應(yīng)該有較寬的線性范圍。

3.細胞內(nèi)的其他基因產(chǎn)物不會干擾報告基因產(chǎn)物的檢測，同時報告基因的表達也不改變宿主細胞的生理功能。
 

三，常用的熒光素酶報告基因有哪些？

熒光素酶（Luciferase）是自然界中能發(fā)出熒光的酶的統(tǒng)稱。他們可以通過酶促反應(yīng)催化底物產(chǎn)生自發(fā)熒光。熒光素酶因其便于檢測和靈敏度高等特性常做為報告基因被廣泛用于生化檢測實驗中。

其中應(yīng)用最廣泛的是螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase ）和海腎熒光素酶（Renilla luciferase）。

 

 

熒光素酶最大發(fā)射波長可達560nm,在體內(nèi)還會紅移，大約是在610nm,具有更好的組織穿透性，適用于動物內(nèi)臟較深部位的組織成像；海腎熒光素酶最大發(fā)射波長480nm,產(chǎn)生的藍光組織穿透能力弱，適用于動物淺表組織成像；兩者可分別催化各自的底物發(fā)出不同顏色的熒光，且兩種光吸收波長不同，檢測互不干擾，因此可在同一個化學反應(yīng)體系中同時使用，由此雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)受到廣泛青睞。

了解了什么是報告基因和熒光素酶后，我們來看看什么是熒光素酶報告基因。

熒光素酶報告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。這種報告系統(tǒng)，是檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用的一種檢測方法。分單熒光素酶報告基因和雙熒光素酶報告基因。

 

如何選擇熒光素酶產(chǎn)品？

我們知道有單熒光素酶報告基因和雙熒光素酶報告基因，我們就需要根據(jù)自己的實驗需要構(gòu)建載體，首先我們需要了解自己到底要做什么？清楚的知道我們的實驗設(shè)計方案和目的。

一般來說，雙熒光素酶體系應(yīng)用于：

1.監(jiān)測細胞數(shù)量（實驗前&實驗后，例如細胞毒性的影響）
2.評估轉(zhuǎn)染效率，消除組間轉(zhuǎn)染效率的影響

3.分析實驗結(jié)果的特異性

4.穩(wěn)定細胞系實驗中需檢測不同因子對穩(wěn)定細胞系的影響，用對照（雙熒光素酶體系）去檢測可能的細胞毒性以及對特異性的影響。

單熒光素酶系統(tǒng)則適用于：

1.同一實驗組進行多次檢測分析（活細胞中監(jiān)測時間曲線動態(tài)分析）。

2.穩(wěn)定細胞系，轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)效率在穩(wěn)定細胞系中并不非常重要。