上一期，陳老師為大家介紹了活細(xì)胞分析在免疫學(xué)中的十大應(yīng)用（其中前五個重點應(yīng)用）；今天書接上文，我們一起來看看Incucyte®在免疫學(xué)研究中的另外五大應(yīng)用：

1. 吞噬作用和細(xì)胞清除

2. 細(xì)胞增殖及計數(shù)

3. 細(xì)胞鑒定和免疫分型

4. 細(xì)胞激活和分

5. 細(xì)胞健康和凋亡

6. 免疫細(xì)胞殺傷（細(xì)胞溶解）

7. NETosis

8. 趨化作用

9. 病毒感染

10. 抗體內(nèi)化
    
     

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吞噬作用和細(xì)胞清除

吞噬作用是一種特殊形式的細(xì)胞內(nèi)吞作用，可將微生物病原體和外來的、垂死的細(xì)胞滅活并從體內(nèi)清除。評估吞噬作用的常用方法通常為單點分析（例如高內(nèi)涵分析），需要細(xì)胞分離（例如流式細(xì)胞術(shù)）或清洗/淬滅標(biāo)記病原體（例如熒光素標(biāo)記）。

Incucyte®則大大簡化了分析流程。使用pH值敏感染料（如pHrodo®）標(biāo)記活細(xì)胞，使該標(biāo)簽與細(xì)菌壁蛋白或目標(biāo)細(xì)胞連接。當(dāng)?shù)鞍谆蚰繕?biāo)細(xì)胞被吞噬并進(jìn)入吞噬體的酸性環(huán)境時，可以測量染料熒光隨時間的增強(qiáng)。這種方法能夠區(qū)分吞噬作用和非特異性的細(xì)胞吸收或表面結(jié)合的非內(nèi)化標(biāo)簽，提高檢測準(zhǔn)確性。
 

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NETosis

NETosis是一種獨特的細(xì)胞程序性死亡的形式，也是機(jī)體防御感染機(jī)制之一。當(dāng)中性粒細(xì)胞遇到入侵的病原體時，它們會釋放出一種抗菌蛋白和染色質(zhì)的混合物來捕獲和降解微生物。

Incucyte®可結(jié)合 Incucyte® Cytotox 綠色試劑實時自動定量分析執(zhí)行 NETosis 過程的中性粒細(xì)胞的膨脹和解聚階段，以及之后的 NET 釋放過程。實時數(shù)據(jù)分析也有助于確定補(bǔ)充生化分析的最佳時間點，如NETs中細(xì)胞外骨髓氧化酶（MPO）的存在（Gupta, et al., 2017）。此文章總結(jié)說，活細(xì)胞分析是 "評估中性粒細(xì)胞生理學(xué)和NETosis、以及迅速開發(fā)和測試新的中性粒細(xì)胞靶標(biāo)的有力工具"。
 

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趨化作用

趨化作用是細(xì)胞在化學(xué)刺激下的定向運動，是免疫反應(yīng)的一個重要組成部分。中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞都會以這種方式被吸引到病原體和炎癥刺激物上。Incucyte® Clearview 96孔趨化板每個孔中都有精確的激光鉆孔供細(xì)胞移動通過。與傳統(tǒng)的Boyden Chamber實驗不同的是，當(dāng)細(xì)胞向化學(xué)試劑移動時，可以對其進(jìn)行可視化，量化動力學(xué)，能夠更深入地洞察細(xì)胞隨時間的全部生理特征和形態(tài)變化。另一個好處是，僅需傳統(tǒng)方法1/5~1/10的細(xì)胞數(shù)量，且重復(fù)性更好。
 

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病毒感染 

在體外測量病毒在哺乳動物細(xì)胞中的感染性和復(fù)制能力對于我們了解病毒感染疾病、篩選新的抗病毒藥物和疫苗以及免疫細(xì)胞佐劑至關(guān)重要。與傳統(tǒng)的蝕斑實驗和病灶形成實驗相比，Incucyte®可以通過計算被熒光蛋白（如GFP）標(biāo)記的病毒的細(xì)胞數(shù)量和程度來自動量化病毒的傳播和復(fù)制能力，同時還可以評估病毒滴度。此外，HD圖像和實時拍攝還提供了病毒侵染后的細(xì)胞凋亡或壞死等相關(guān)數(shù)據(jù)。

Incucyte®活細(xì)胞分析工作流程的一個有趣的優(yōu)點是，當(dāng)添加病毒或病毒復(fù)制體到細(xì)胞后，培養(yǎng)板不需要離開培養(yǎng)箱。因此，即使是高度傳染性的病毒也可以在適當(dāng)?shù)纳�物隔離設(shè)施中安全地進(jìn)行分析，而不會使操作者暴露在潛在的危險中。
 

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抗體內(nèi)化

單克隆抗體（mAb）和抗體偶聯(lián)藥物（ADCs）被廣泛用于靶向免疫細(xì)胞，特別是在腫瘤免疫學(xué)和自身免疫性疾病中。這些生物制劑的一個關(guān)鍵特性是內(nèi)化到不同細(xì)胞中的程度和速度決定了它們的療效、安全性和藥效曲線。

傳統(tǒng)方法先對每種抗體進(jìn)行費時費力的標(biāo)記，過程中需要洗滌步驟，且只能進(jìn)行單一時間點的分析。整個操作過程繁雜、細(xì)胞易損失、數(shù)據(jù)遺漏。因此，在整個抗體篩選和功能表征過程中，迫切需要一種高效簡便的方法，在活細(xì)胞狀態(tài)下進(jìn)行實時分析快速地定量抗體內(nèi)化水平。

Incucyte®可以直接在96孔板中檢測Ab內(nèi)化。使用對pH值敏感的熒光染料（Incucyte® Fabfluor-pH）直接與Ab的Fc段結(jié)合，即可檢測Ab進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)隨酸性條件的增強(qiáng)，熒光信號增反映其內(nèi)化的過程。只需一步添加染料，無需洗滌，即可實現(xiàn)抗體內(nèi)化的快速、動力學(xué)、高通量分析。同一表面蛋白的不同Abs具有不同的內(nèi)化特征，通過實時活細(xì)胞分析可在生物藥篩選和優(yōu)化的關(guān)鍵步驟中，準(zhǔn)確且高效地比較不同的抗體候選藥物及生產(chǎn)批次的內(nèi)化率。

說一千，道一萬。實時、活的、動態(tài)過程，高通量，這就是Incucyte®！

陳老濕彷佛看到了Octet®的身影~分子水平+細(xì)胞水平，神仙組合~