圖1  各種免疫細(xì)胞或免疫組分在腫瘤免疫應(yīng)答中的作用機(jī)制

因此，在體外建立ICK模型至關(guān)重要。目前有多種傳統(tǒng)技術(shù)可用于評(píng)估ICK，如流式細(xì)胞儀和各種生化讀數(shù)等，然而，這些工具對(duì)洞察細(xì)胞間的動(dòng)態(tài)相互作用仍然有限：

1. 采用耗時(shí)的“終點(diǎn)式”檢測(cè)，每次檢測(cè)只能獲取一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的結(jié)果；

2. 需要多次清洗，需要利用輻射性物質(zhì)（如51Cr釋放實(shí)驗(yàn)）或抗體標(biāo)記（如流式細(xì)胞分析）進(jìn)行定量分析；

3. 需要將多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的不同樣本（孔）數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)在一起，以生成時(shí)程曲線，從而可能導(dǎo)致人為因素誤差；

4. 檢測(cè)時(shí)缺少環(huán)境控制而導(dǎo)致細(xì)胞變化，從而可能出現(xiàn)不需要或誤導(dǎo)性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
    

• 細(xì)胞毒性T細(xì)胞殺傷
• 抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）
• 在腫瘤球模型中的免疫細(xì)胞殺傷

圖2  采用Incucyte®活細(xì)胞分析系統(tǒng)分別檢測(cè)免疫細(xì)胞對(duì)貼壁腫瘤細(xì)胞（SKOV-3，左圖）、懸浮腫瘤細(xì)胞（WIL-NS，中圖）和A549腫瘤球的殺傷作用（右圖）。
 

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Incucyte®免疫細(xì)胞殺傷試驗(yàn)的主要優(yōu)勢(shì)
1. 實(shí)時(shí)查看免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間的相互作用及殺傷過(guò)程，并進(jìn)行全自動(dòng)化的分析

• 觀察并量化免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間的動(dòng)態(tài)相互作用
• 揭示細(xì)胞之間的相互作用，從而深入了解細(xì)胞亞群之間的免疫突觸
• 使用非干擾試劑測(cè)量腫瘤細(xì)胞的死亡和對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用

 

圖3  利用Incucyte®免疫細(xì)胞殺傷試驗(yàn)查看免疫細(xì)胞/腫瘤細(xì)胞相互作用。(1)細(xì)胞毒性T細(xì)胞和紅色熒光標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞之間的相互接觸。T細(xì)胞分裂。(2)腫瘤細(xì)胞受到細(xì)胞毒性T細(xì)胞的攻擊：“死亡之吻”。(3) 追蹤腫瘤細(xì)胞凋亡（caspase 3/7綠色熒光標(biāo)記）、核固縮和細(xì)胞死亡。(4)腫瘤細(xì)胞分裂。
 

 

圖4  使用Incucyte® FabFluor-488試劑，在共培養(yǎng)體系中查看和量化免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間的作用。A549腫瘤細(xì)胞（CytoLight Red熒光試劑標(biāo)記）與預(yù)激活或未激活的PBMC共培養(yǎng)，加入Incucyte® FabFluor-488-α-CD45和Incucyte® Opti-Green試劑來(lái)標(biāo)記淋巴細(xì)胞。加入PBMC 2小時(shí)后拍照顯示CD45+細(xì)胞（綠色）和A549細(xì)胞（紅色）之間的作用。相互作用（overlay，圖示黃色mask）定量分析顯示活化效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞的相互作用顯著增加（結(jié)果見(jiàn)柱狀圖）。這一分析采用Incucyte® Cell-By-Cell 軟件完成。

2. 直接測(cè)量腫瘤細(xì)胞死亡和活性

• 使用直觀的Incucyte®圖像分析工具有選擇地量化腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡。

• 使用Incucyte® Caspase 3/7凋亡試劑檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡，使用Incucyte® NucLight慢病毒試劑檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖。

• 在細(xì)胞培養(yǎng)箱中全程監(jiān)控腫瘤細(xì)胞的殺傷過(guò)程。可用于長(zhǎng)期研究(>5天)。

SK-OV-3細(xì)胞+未激活人PBMC


SK-OV-3細(xì)胞+預(yù)先激活的人PBMC
 

   

圖5  用Incucyte®活細(xì)胞分析系統(tǒng)查看并量化ADCC效應(yīng)。

 

3. 有多種靈活的共培養(yǎng)體系和方案供選擇

• 針對(duì)PBMC、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CD8+)和NK細(xì)胞與貼壁或懸浮腫瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)的細(xì)胞免疫細(xì)胞殺傷方案

• 在T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性和抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC）試驗(yàn)中靈活選擇效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞

• 可采用3D腫瘤球模型，對(duì)免疫細(xì)胞殺傷進(jìn)行實(shí)時(shí)查看和量化

 

圖6  將PBMC與SKOV-3（HER2陽(yáng)性）或A549（HER2陰性）腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，其中腫瘤細(xì)胞預(yù)先用NucLight Red熒光試劑標(biāo)記。(A) 曲妥珠單抗誘導(dǎo)SKOV3腫瘤細(xì)胞增殖呈濃度依賴(lài)性抑制效應(yīng)，(B) A549細(xì)胞未觀察到抑制作用。(C) 曲妥珠單抗抑制SKOV-3細(xì)胞增殖的濃度反應(yīng)曲線。(D) 對(duì)照組和曲妥昔單抗組在72小時(shí)的代表性圖像。上一排是原始圖像，下一排是mask圖。

4. 即混即讀的96/384孔板方案，可用于高通量篩選

• 無(wú)需清洗，無(wú)需取出細(xì)胞，無(wú)放射性，無(wú)需抗體標(biāo)記

• 設(shè)置完實(shí)驗(yàn)即可走開(kāi)，完全自動(dòng)化的圖像捕獲和定量分析

• 兼容流式細(xì)胞術(shù)和終點(diǎn)式生化測(cè)量——當(dāng)檢測(cè)完成時(shí)，采集細(xì)胞/上清液可用于下游試驗(yàn)
   

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