宿主殘留蛋白HCP ELISA抗體覆蓋率檢測的應用
瀏覽次數(shù):4715 發(fā)布日期:2019-11-1
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現(xiàn)今許多生物藥物(抗體、疫苗、重組蛋白等)的制備還是通過生物體系合成,諸如非洲綠猴腎細胞(Vero細胞)和中國倉鼠卵巢(CHO)細胞,大腸桿菌等,這些細胞稱為宿主細胞。盡管已經采用多種純化方式,但是在生物藥物中還是可能會有微量的宿主蛋白殘留(HCP)。由于HCP殘留可能對生物藥物的安全性和藥效性能產生一定影響,因此,精準的HCP檢測對于控制生物藥物的質量和安全尤為重要。如:
目前,檢測HCP應用最廣泛、最有實用價值的方法就是采用ELISA方法,它檢測的是總HCP組分,重復性好,靈敏度高,便于設定檢測限度和建立技術規(guī)范。但是ELISA方法檢測也有一定的局限性,比如HCP成分不一,每一種蛋白成分含量也不一致,作為免疫原產生抗體的能力也不相同,所以由此制備的抗HCP抗體并不能完全檢測HCP中所有成分,因此會有“漏檢”,所以需要評估HCP ELISA抗體的覆蓋率(Coverage)。
HCP ELISA抗體覆蓋率的評估方法一般會采用雙向電泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)和蛋白質免疫印跡(Western Blot,WB)技術結合的辦法。將分別得到的HCP總蛋白分離圖像和HCP抗體結合的圖像放在一起疊加、匹配膠點、分別記錄匹配和未匹配的膠點數(shù)量,計算覆蓋率結果,F(xiàn)在還會使用2D-DIGE技術進行HCP抗體覆蓋率的檢測,例如使用cy3標記總蛋白,使用cy5標記的anti-HCP的二抗,這樣最后可以最后一起檢測,不用跑兩塊膠,節(jié)省時間和試劑花費成本等。
美國Azure公司的 Sapphire™ 雙模式多光譜激光成像系統(tǒng),專業(yè)技術,帶來高質量檢測結果。配有四激光,RGB三色激光即可進行2D和2D-DIGE的檢測,大平臺,檢測更順暢,儀器可進行分辨率,激光強度,聚焦深度的設置,特別是聚焦,采用激光共聚焦光路,減少樣品表面灰塵等的干擾,提高信噪比,檢測更靈敏。
除了上面的應用,sapphire還可檢測多種樣品類型-包括膜/PAGE膠/同位素標記樣品/瓊脂糖凝膠/培養(yǎng)皿/96孔板/微陣列芯片/組織切片等等。