細胞轉(zhuǎn)染方法、轉(zhuǎn)染效率低的原因及其解決方案介紹
瀏覽次數(shù):7943 發(fā)布日期:2014-9-8
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細胞轉(zhuǎn)染常用方法概述
轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独;化學介導方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和多種陽離子物質(zhì)介導的技術(shù);生物介導方法,有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染和現(xiàn)在比較常用的各種病毒介導的轉(zhuǎn)染技術(shù)。
理想的細胞轉(zhuǎn)染方法應該具有轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性小等特點。病毒介導的轉(zhuǎn)染技術(shù)是目前轉(zhuǎn)染效率最高的方法,同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是,病毒轉(zhuǎn)染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有很強的選擇性,在一般實驗室中很難普及。目前非病毒介導的轉(zhuǎn)染技術(shù)中,轉(zhuǎn)染效率最高的方法是以陽離子非脂性物質(zhì)為主的混合物配方。該類轉(zhuǎn)染物質(zhì)介導的細胞轉(zhuǎn)染具有廣譜、細胞毒性小、性能穩(wěn)定等特點,而且不受培養(yǎng)液中的血清和抗生素的干擾,比脂質(zhì)體介導的轉(zhuǎn)染方法更方便,因而在轉(zhuǎn)染技術(shù)領(lǐng)域逐漸占據(jù)主流地位。
需要指出的是,無論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù),要獲得最佳的轉(zhuǎn)染結(jié)果,可能都需要對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化。轉(zhuǎn)染效果的影響因素很多,如細胞類型、細胞培養(yǎng)條件和生長狀態(tài)、轉(zhuǎn)染方法、轉(zhuǎn)染操作細節(jié)等等。遇到問題,需要綜合考慮。
轉(zhuǎn)染效率低的常見原因及其解決方案