南模助力揭示心臟流出道血管平滑肌細胞發(fā)育新模式

瀏覽次數(shù)：10931　發(fā)布日期：2019-8-23　來源：南模生物公眾號

心臟流出道發(fā)育異常是造成先天性心臟病的一種重要原因，其參與形成許多復雜性心血管畸形，約占復雜畸形發(fā)生率的25%。在流出道發(fā)育過程中，一系列不同類型的細胞群體（包括心肌細胞、間充質細胞、平滑肌細胞等）之間將會有復雜的相互影響及轉換，但具體模式鮮有系統(tǒng)性研究。

2019年7月30日，國際學術期刊Cell Reports在線發(fā)表了中國醫(yī)學科學院阜外醫(yī)院周洲課題組的最新科研成果“Single-Cell RNA-Seq of the Developing Cardiac Outflow Tract Reveals Convergent Development of the Vascular Smooth Muscle Cells”。

該研究系統(tǒng)分析了小鼠心臟流出道5萬多個細胞（來自3個連續(xù)發(fā)育時期）的單細胞轉錄組，并結合單分子熒光原位雜交和譜系示蹤技術，發(fā)現(xiàn)在心臟流出道發(fā)育過程中存在心肌細胞向血管平滑肌細胞轉換的情況，進而首次提出了大動脈基部平滑肌匯聚發(fā)育的概念。

南模生物為該研究提供了Tnnt2-Dre;CAG-RSR-tdTomato小鼠模型。

研究人員首先通過單細胞測序數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)心臟流出道發(fā)育過程涉及6種類型的細胞，并可進一步細分為17個亞群（Fig.1）。

Fig.1 心臟流出道發(fā)育涉及細胞亞群及其分子特征

為了搞清細胞亞群之間的關系，研究人員構建了力導向的KNN圖（Fig.2），分析細胞亞群在3個連續(xù)發(fā)育時期的動態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)除了間充質細胞以外，還有一類心肌細胞（C9亞群）也同時向平滑肌細胞進行轉變。因此作者提出一種假說，心臟流出道的平滑肌存在一種稱為“匯聚發(fā)育”的模式。

Fig.2 心臟流出道平滑肌的匯聚發(fā)育模式

通過單分子熒光原位雜交技術（Fig.3），研究人員對心臟流出道連續(xù)橫切面（從近端到遠端）進行觀察，發(fā)現(xiàn)了其從心肌細胞表型向平滑肌細胞逐漸過渡的現(xiàn)象，并且觀察到表達Myh7（心肌細胞標志物）的細胞也同時表達Cxcl12（血管平滑肌標志物），驗證了在心臟流出道發(fā)育過程中心肌細胞向平滑肌細胞轉變的推論。

Fig.3 單分子熒光原位雜交共表達結果圖

最后研究人員利用Dre-rox譜系示蹤技術（即構建Tnnt2-Dre; CAG-RSR-tdTomato小鼠模型，F(xiàn)ig.4），特異性地標記心肌細胞后代，通過觀察到tdTomato與Myh11基因（血管平滑肌標志物）的共表達再次驗證了流出道發(fā)育過程中心肌細胞向平滑肌細胞轉變的結論。