Western blotting 技術(shù)是把電泳分離的組分從凝膠轉(zhuǎn)移到一種固相支持體，并以針對(duì)特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針進(jìn)行檢測(cè)。 Western使用的探針是抗體，它與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現(xiàn)的抗原表位發(fā)生特異性反應(yīng)。這種技術(shù)的作用是對(duì)非放射性標(biāo)記蛋白組成的復(fù)雜混合物中的某些特異蛋白進(jìn)行鑒別和鑒定。

 

儀器：高壓鍋、電動(dòng)勻漿機(jī)、高速離心機(jī)、垂直板電泳轉(zhuǎn)移裝置、脫色搖床。

試劑：單去污劑裂解液、分離膠、4％濃縮loading、G250考馬斯亮藍(lán)溶液、5XSDS上樣緩沖液、電泳緩沖液、轉(zhuǎn)移緩沖液、10X麗春紅染液、封閉液、TBST、TBS、顯影液、定影液、抗體、ECL化學(xué)發(fā)光試劑。

雜品與耗材：各種規(guī)格的吸頭、離心管和加樣器；各種規(guī)格的燒杯、量筒和平皿等玻璃器材；硝酸纖維素膜，乳膠手套，口罩，保鮮膜，X-光片夾，X-光片，計(jì)時(shí)器，吸水紙。

 

Western blotting 實(shí)驗(yàn)流程：

樣本處理→→蛋白定量→→樣本均一化→→制膠→→上樣→→電泳→→轉(zhuǎn)膜→→染膜→→封閉→→雜交上一抗→→二抗→→顯色→→曝光→→數(shù)據(jù)處理→→膜的再生

 

 

 

 

 

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