應用案例一：Binaree組織透明化技術結合三維重建血管在研究低氧條件下腦血管重塑
The Role of PRRC2B in Cerebral Vascular Remodeling Under Acute Hypoxia in Mice
 

高原暴露可導致多種認知功能障礙。腦血管系統(tǒng)通過減少對大腦的氧和營養(yǎng)供應在缺氧誘導的認知缺陷中起著不可或缺的作用。RNA N6‐甲基腺苷(m6A)易受修飾并調(diào)節(jié)基因表達以應對環(huán)境變化，包括缺氧。采用Binaree組織透明化與共聚焦成像分析發(fā)現(xiàn)在內(nèi)皮細胞中，條件敲除PRRC2B可促進缺氧誘導的血管重塑和腦血流再分布，從而減輕缺氧誘導的認知功能下降。因此，PRRC2B作為一種新型RNA結合蛋白在缺氧誘導的血管重構過程中發(fā)揮重要作用。這些發(fā)現(xiàn)為缺氧誘導的認知功能下降提供了新的潛在治療靶點。
 

研究亮點
組織透明化技術結合血管三維重建與高分辨率血管成像
Binaree技術結合三維重建，使得血管成像的分辨率大大提高，能夠清晰地展示低氧條件下血管的微細結構變化，如新生血管的形成、血管分支的變化等。

動態(tài)與定量分析低氧條件下的血管反應
使用透明化和三維重建技術，能夠動態(tài)觀察并記錄低氧環(huán)境下腦血管的重塑過程。這包括詳細追蹤低氧引起的血管生成、擴展、重塑和功能性改變，幫助理解這些過程的時間動態(tài)特征。

通過三維重建獲得的數(shù)據(jù)，可以進行精確的定量分析，評估血管長度、分支點數(shù)量、血管密度、直徑等參數(shù)的變化。這些量化數(shù)據(jù)有助于深入理解低氧條件對血管結構的具體影響。

驗證PRRC2B在內(nèi)皮細胞中的關鍵作用
驗證了PRRC2B在內(nèi)皮細胞遷移、血管生成和結構重塑中的關鍵作用。這些技術提供了直觀的證據(jù)，支持PRRC2B作為潛在治療靶點在低氧誘導認知障礙中的應用前景。

應用案例二：Binaree快速組織透明化結合大鼠MACO缺血模型

組織透明化MCAO模型大鼠腦內(nèi)血管三維可視化流程

MCAO模型組織透明化大鼠腦內(nèi)血管三維可視化血管重建

(A)凝集素染色的3mm厚大鼠腦切片血管三維重建圖。圖像由配備4倍物鏡的LSMS獲得。
(B)最大投影(z-stack)腦冠狀切片標記線三維圖像為正交視圖所見xz平面。
(C-F)為(A)框狀區(qū)域XY平面(成像體積為1000 μm ×1000 μm ×1000 μm)的高倍視圖。
(D, F)示蹤劑(C, E)示蹤劑模型。
(G, J)為(A)中框框區(qū)域的三維重構圖。
(H, I)顯示了(G, J)隨機深度的腦切片圖像(相對于頂部成像面Z= 640 um)。
(K)每片3 - 4個視場的長度和血管直徑量化(n=3)。
比例尺= 2mm in (A-B)， 100 μ in (G- f, H-I)， 300 μ in (G, J)。

MCAO后24小時組織透明化樣本gfap相關免疫熒光強度的三維可視化和定量分析

 

(A-B)大鼠0.5 mm厚的腦切片經(jīng)凝集素(A)和GFAP(B)染色后的三維重建。(C-J)顯示(A和B)中框區(qū)域的高倍放大視圖。損傷側皮質(zhì)血管密度較對側減少，gfap陽性熒光強度較對側增加。(E-F)損傷側皮質(zhì)和紋狀體gfap陽性細胞的形態(tài)學變化。(G) GFAP比值圖。MCAo損傷后24 h同側與對側皮質(zhì)相關熒光強度。梗死區(qū)gfap相關熒光強度明顯增加。數(shù)據(jù)以平均值表示:誤差條表示平均值的標準誤差。“pc0.05。比例尺A-B為1 mm, C-J為100 μm, K-N為50 μm。