什么是細胞增殖檢測

細胞增殖是細胞在周期調(diào)控的因子下，通過DNA復(fù)制等反應(yīng)，完成細胞分裂的過程。在細胞增殖中，新細胞的產(chǎn)生過程影響著體內(nèi)所有組織的發(fā)育、生長和維持，同時，它也被嚴格調(diào)控著，以防失控的細胞分裂（可出現(xiàn)在各種癌癥）導(dǎo)致腫瘤的形成和器官功能的破壞。正因為細胞增殖對生物活動的這種廣泛影響，其在各種環(huán)境中的準(zhǔn)確評估變得十分重要。

                                                           腫瘤細胞增殖和轉(zhuǎn)化過程

細胞增殖是通過細胞分裂引起的細胞數(shù)量增加，在整個生命周期中對正常組織發(fā)育和維持是必須的。一些類型的細胞會處于持續(xù)增殖狀態(tài)，如皮膚和骨髓細胞，但許多成人組織中的細胞會處于非增殖狀態(tài)，只有在損傷或感染時，才能被激活來補充細胞。與之相反，細胞周期關(guān)鍵基因突變引起的細胞增殖失調(diào)是各類癌癥的標(biāo)志，會造成腫瘤異常的不受控制的生長。

增殖檢測一般用于分析分裂中的細胞數(shù)量的變化，進而反應(yīng)細胞的生長狀態(tài)及活性，細胞增殖檢測是細胞分析和藥物研發(fā)中經(jīng)常會使用的手段。目前廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué)，分子生物學(xué)，藥代動力學(xué)等領(lǐng)域。


細胞增殖檢測的方法

一類是直接法，這種方法就是直接測定進行分裂的細胞數(shù)來評價細胞的增殖能力，另一類是間接的方法，我們通過檢測細胞的活力來評價細胞的增殖能力。

常見的細胞增殖檢測方法包含：直接計數(shù)法；MTT檢測法；MTS檢測法；CCK-8檢測法；3H-TdR滲入法；Brdu/EdU檢測法；CFSE檢測法；刃天青還原法；活細胞蛋白酶底物法/ATP法等。

                                                                     常見檢測方法對比
其中，MTT比色是一種目前被廣泛采用的檢測細胞生長和存活的方法。


CCK-8試劑盒

CCK-8試劑盒全稱Cell Counting Kit-8，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

                                                               CCK-8檢測細胞活性原理圖
其工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細胞數(shù)量。
CCK-8被經(jīng)常用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗等。
優(yōu)點：
· 酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾；
· 靈敏度高，可以測定較低細胞密度；
· 細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到最佳測定時間；
· 檢測時間短；
· 重復(fù)性優(yōu)于MTT法；
· 操作簡單，省時省力，省去了洗滌細胞，適合批量樣品檢測；
· 檢測試劑很穩(wěn)定。




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