開學(xué)寄語

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培養(yǎng)細胞的老師們都知道

細胞的生命是極其脆弱的

在培養(yǎng)過程中有哪些行為是比較傷害細胞的呢？

在培養(yǎng)貼壁細胞過程中

消化過程在一定程度上是對細胞的一種折磨

但是又不得不進行這個過程

所以如何做好細胞消化

善待細胞們

是我們一定要了解的步驟~
 

胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時細胞由于自身內(nèi)部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力的作用下成為球形。
 

在使用胰酶（Trypsins）細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。
胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CD Marker也可能會下降。
胰酶進行分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時液體體積會膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會降低消化效果并可能造成污染。
胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對于纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。胰酶消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。

❤  注意：不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。

一般肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙狀移動就可以了，這時就應(yīng)該停止消化。

如何進行細胞消化

對大部分細胞消化來說，可以在消化到差不多快要脫落的時候，移除大部分胰酶，然后直接加新鮮的培養(yǎng)基將細胞吹打下來，省去離心步驟。殘余的胰酶含量很低，所以不會對細胞產(chǎn)生任何影響。
對于難消化的細胞，如HCT15, LS411和KM12，用不含Ca²⁺，Mg²⁺的PBS洗滌一次后，加入稍微多一點胰酶，置37ºC徹底消化（一般為幾分鐘）至脫落（一晃細胞就掉下來），然后再加培養(yǎng)基終止胰酶反應(yīng)、離心 (若是無血清培養(yǎng)基，需改加胰酶抑制劑)。這么做的道理是，細胞消化不徹底，勢必會增加吹打輔助脫落的次數(shù)，而吹打次數(shù)越多，細胞活性越差。
若細胞消化過度，可以加入血清終止胰酶對細胞的繼續(xù)作用，因為血清中含有蛋白可與胰酶結(jié)合，利用競爭抑制原理，中和胰酶消化，不能直接用胰酶吹打。應(yīng)加入過量血清，約為胰酶的1-2倍，然后離心去上清，培養(yǎng)基重懸，這時應(yīng)該注意將細胞吹散，因為一般胰酶消化過度之后細胞容易聚集成團，不吹散的話會嚴重影響細胞狀態(tài)。吹打不宜過猛，20下左右，肉眼完全看不到顆粒狀懸浮后再吹幾下即可。

BI提供動物來源的傳統(tǒng)胰酶及基因工程生產(chǎn)的重組胰蛋白酶。

貨號：03-079-1B

動物胰酶普遍用于血清培養(yǎng)，不同的細胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。貼壁不牢和半貼壁細胞盡量使用濃度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培養(yǎng)箱孵育，這樣易于控制，對細胞的傷害也降到最低。對于難消化的細胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶，而不是無限地延長消化時間。
EDTA有什么作用呢？許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用胰酶/EDTA聯(lián)合作用。胰酶切割ECM負責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca²⁺，抑制Integrin的貼壁活性，所以EDTA的作用更加溫和。
重組胰酶用于無血清培養(yǎng)。重組胰酶具有與動物源性胰蛋白酶相同的酶學(xué)性質(zhì)，但是不含任何動物源成分，可替代胰蛋白酶使用（常用于細胞治療）。
BI生產(chǎn)的重組胰酶Recombinant Trypsin EDTA Solution ，堪稱傳統(tǒng)胰酶的完美替代者。無雜酶，無外源性或內(nèi)源性病毒污染，無PMSF（蛋白酶抑制劑）、EDTA等任何蛋白酶抑制劑，較傳統(tǒng)的胰酶使用方便，在細胞培養(yǎng)實驗中減少了很多不必要的操作，細胞培養(yǎng)效果大大提高。

BI提供的胰酶種類如下表，用戶也可根據(jù)自己的需求進行選擇噢~

 

BI中國市場部：上海逍鵬生物科技有限公司
產(chǎn)品咨詢：021-58785545-8006, 18917190011
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