細胞增殖可以通過測量諸如新合成的DNA、總核酸含量或細胞分裂等參數(shù)來確定(見表1)。 最簡單的方法是使用可與胺反應(yīng)的細胞跟蹤指示劑(例如CytoTell 染料)監(jiān)視細胞分裂,這些可滲透細胞的指示劑與細胞質(zhì)蛋白共價結(jié)合。由于這種共價偶聯(lián)反應(yīng),CytoTell 染料無法轉(zhuǎn)移到相鄰細胞中,并且可以在細胞中保留好幾代(最多可以觀察到9代)。隨著細胞分裂,CytoTell 染料在子細胞之間均等分布,并且每一代新細胞的熒光強度均是其親本的一半?梢允褂脴(biāo)準(zhǔn)的含甲醛固定劑和基于皂苷的透化緩沖液對用CytoTell 染料標(biāo)記的細胞進行固定和透化,以進行進一步的細胞內(nèi)分析。
表1.用于檢測細胞增殖的試劑和檢測列表。
檢測類型 | 原理 | 試劑/測定 | 儀器 |
檢測細胞分裂 |
使用與細胞質(zhì)蛋白結(jié)合的可滲透細胞的染料。(隨著細胞分裂,染料被轉(zhuǎn)移到子細胞。新一代細胞的熒光強度是其親本的一半。) |
熒光酶標(biāo)儀,熒光顯微鏡或流式細胞儀 |
|
檢測新合成的DNA |
在細胞周期的S期將修飾的核苷酸摻入新合成的DNA中。一旦摻入,這些核苷類似物就可以用作細胞周期和增殖標(biāo)記物,可以使用標(biāo)記的探針進行檢測以鑒定增殖細胞。 |
Bucculite dT摻入細胞增殖熒光成像試劑盒 |
熒光顯微鏡 |
BrdU (需要酶或熒光團標(biāo)記的抗BrdU抗體) |
可適用于比色,熒光或化學(xué)發(fā)光儀器 |
||
檢測總核酸含量 |
使用可滲透細胞的核酸染色劑,該試劑能展現(xiàn)出與DNA質(zhì)量成比例的發(fā)射信號。然后對染色的群體進行流式細胞術(shù)分析,以生成DNA直方圖,觀察細胞周期每個階段中細胞的百分比。 |
流式細胞儀 |
|
百螢生物是美國AAT Bioquest中國區(qū)域代理商,為您提供AAT Bioquest最優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、最詳盡的技術(shù)和最前沿的資訊,歡迎來電咨詢!