人體外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)搭配染色體核型分析技術(shù)是診斷染色體變異的重要手段。淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)是染色體標(biāo)本制備的關(guān)鍵。培養(yǎng)基的選擇、秋水仙素的用量及時(shí)間、溫度、pH，固定、滴片等其中任何一點(diǎn)處理不當(dāng)，就極有可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。本期專題，我們就聊聊 “外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，如何簡(jiǎn)化操作、做好細(xì)節(jié)、提高細(xì)胞培養(yǎng)成功率？”

“ 一管到底 ”簡(jiǎn)化操作，提高效率

外周血培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，過(guò)程復(fù)雜，因此我們建議采用 “一管到底” 的方法，用離心管代替培養(yǎng)瓶，省去了敲除培養(yǎng)瓶蓋的步驟，也無(wú)需轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸液，杜絕了常規(guī)法中潛在的交叉風(fēng)險(xiǎn)，簡(jiǎn)化操作流程，提高了效率。

外周血培養(yǎng)，還要注意這些

1.  接種的血樣愈新鮮愈好，最好是在采血后24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，若不能立刻培養(yǎng)，應(yīng)置于4℃存放，避免保存時(shí)間過(guò)久影響細(xì)胞活力。

2. 秋水仙素是使細(xì)胞停止在中期的關(guān)鍵，因此使用秋水仙素的質(zhì)量很重要，勿使用來(lái)源不明的廠商產(chǎn)品。

3. 使用的低滲液、固定液需要現(xiàn)用現(xiàn)配，避免低滲作用，細(xì)胞固定效果不佳，無(wú)法收獲完美染色體。

4. 收獲細(xì)胞時(shí)，吸取上清液時(shí)動(dòng)作要輕， 臨近底部要注意吸取的動(dòng)作，否則易把培養(yǎng)的細(xì)胞吸出。每次吸取上清液都要在管的底部留上大約1mL的上清 , 以確保培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)量 。當(dāng)最后一次加入固定液后， 要用力充分混勻 ，防止細(xì)胞粘連在一起而影響下面步驟的順利進(jìn)行 。

5. 滴片是染色體制備中影響染色體形態(tài)的關(guān)鍵一步，首先是滴片用的玻片要非常干凈，冰凍4h以上，即為冰片，滴片時(shí)現(xiàn)用現(xiàn)拿，如果冷凍不夠，細(xì)胞難以貼附在玻片上，會(huì)影響染色體的分散和分帶效果。滴片時(shí)也要注意保持滴管與玻片距離，一般控制在20 ～30cm ,而且滴的順序要呈S型，讓其盡可能滴勻 。然后用嘴或吸耳球輕輕混勻，最后在酒精燈上快速劃過(guò)幾次，確保細(xì)胞確實(shí)固定好。

6. 此外，培養(yǎng)基的保存很關(guān)鍵，若不是馬上使用，需放入0℃下保存，防止藥品失活。

BI外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基

BI在 ”一管到底“ 方法的基礎(chǔ)上，采用帶有頂膠塞的試管，加樣無(wú)需開蓋，細(xì)胞培養(yǎng)和染色體制備在同一管中進(jìn)行，操作方便，避免污染。

HEPES緩沖體系適用于封閉式細(xì)胞培養(yǎng)。

為確保培養(yǎng)基質(zhì)量，采用高品質(zhì)胎牛血清
 

紅框標(biāo)記處為BI外周血培養(yǎng)制備的完美核型

產(chǎn)品信息：

參考文獻(xiàn)：

曹海濤 . 染色體外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中的幾點(diǎn)體會(huì)  現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志

侯艷香 . 人外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng) 染色體制備及影響因素  檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床 2013，4，10（7）

趙小平， 陳紹坤， 黃燕， 稅青林 . 外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及染色體制備過(guò)程中的問題分析 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué) 2009 ， 36 （11 ）
 

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