各位做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候都遇到過(guò)這種情況嗎？
當(dāng)您開開心心地把養(yǎng)好的細(xì)胞拿出來(lái)
準(zhǔn)備做后續(xù)實(shí)驗(yàn)時(shí)
突然發(fā)現(xiàn)
“啊~~~，我的細(xì)胞又長(zhǎng)跑偏了！��！”
誰(shuí)能體會(huì)實(shí)驗(yàn)猿的這種心塞

那么這個(gè)時(shí)候我們就發(fā)揮出了作為一個(gè)實(shí)驗(yàn)猿的耐心和決心
一定要搞清楚，到底是哪一步出現(xiàn)了問(wèn)題
導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)異常
BI中國(guó)市場(chǎng)部為大家貼心的準(zhǔn)備了一份禮物~
魚骨圖
（進(jìn)入官網(wǎng)點(diǎn)擊相應(yīng)骨刺即可查看相關(guān)訊息噢~）
接下來(lái)，大家跟緊小編的步伐，一起去探索魚骨圖的奧秘吧 ！

魚骨圖是一種分析問(wèn)題產(chǎn)生的質(zhì)量管理方法，此魚骨圖分析造成細(xì)胞形態(tài)發(fā)生異常時(shí)的幾個(gè)主要原因：
◆ 外源污染（微生物污染）
◆ 內(nèi)源異常（細(xì)胞層面）
◆ 人為操作/環(huán)境
◆ 培養(yǎng)基
◆ 輔助試劑
◆ 培養(yǎng)耗材
魚骨圖可幫助研究人員厘清實(shí)驗(yàn)上的問(wèn)題。魚骨圖魚刺的大到小或近到遠(yuǎn),相應(yīng)表示問(wèn)題發(fā)生概率的高低。
接下來(lái)，我們將逐條分析這些污染原因，并為大家附上解決方案。（如下表格點(diǎn)擊貨號(hào)即可查看產(chǎn)品信息）

外源污染

外源污染主要指的是微生物污染，又可分為以下幾點(diǎn)：

  ✫ 真菌，酵母菌  ✫ 細(xì)菌  ✫支原體 ✫ 黑膠蟲 ✫ 病毒 ✫ 細(xì)胞交叉污染
以下幾種微生物污染，通常是肉眼可見突發(fā)式造成細(xì)胞培養(yǎng)基渾濁和變色，在可見光顯微鏡下可以觀察到真菌、酵母菌和細(xì)菌污染狀況。


01  真菌，酵母菌

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 真菌：這類微生物外觀類似棉絮狀的漂浮物，在顯微鏡下可觀察到菌絲體，污染早期不會(huì)使培養(yǎng)基變黃。
酵母菌：顯微鏡下常見成串的珠狀物形態(tài)呈卵形，大約比細(xì)胞小5~10倍，當(dāng)其進(jìn)行出芽生殖時(shí)，會(huì)聚集成連體結(jié)構(gòu)；爆發(fā)污染嚴(yán)重時(shí)，會(huì)造成培養(yǎng)基pH值改變，不易除去。

解決方案：

表1.產(chǎn)品列表

產(chǎn)品名稱-中文名稱 貨號(hào) 作用種類作用種類 兩性霉素B，250mg/ml 03-028-1 真菌，酵母菌和霉菌 兩性霉素B，2500mg/ml 03-029-1 制真霉素，10000units/ml 03-030-1 真菌，酵母菌和霉菌 青鏈雙抗（青霉素-鏈霉素） 03-031-1 對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌G+，革蘭氏陰毒性G- 青鏈雙抗（青霉素-鏈霉素）10X濃縮 03-031-5 青鏈霉素，制真菌素三抗 03-032-1 真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- 青鏈霉素，兩性霉素B三抗 03-033-1 真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- 青鏈霉素，新霉素三抗 03-034-1 真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- 硫酸慶大霉素溶液，50mg/ml 03-035-1 對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌，革蘭氏陰性菌，支原體 卡那霉素溶液，10mg/ml 03-049-1 對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌，革蘭氏陰性菌，支原體

產(chǎn)品名稱-

02  細(xì)菌

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細(xì)菌污染時(shí)，培養(yǎng)基在短時(shí)間內(nèi)變成黃色或白色渾濁，細(xì)胞停止生長(zhǎng)甚至死亡；有些狀況下培養(yǎng)基顏色改變不明顯但細(xì)胞形態(tài)會(huì)變異（出現(xiàn)多角，多核狀況）、細(xì)胞不附著，顯微鏡觀察背景有大量黑點(diǎn)。
解決方案：（同上表格1）
Dr.Cell可提供：微生物測(cè)序檢測(cè)

03  支原體

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支原體種類較多，常以寄生或腐生營(yíng)養(yǎng)方式生長(zhǎng)，廣泛存在于環(huán)境之中，是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程常見污染，經(jīng)常來(lái)源于實(shí)驗(yàn)人員（支原體常見于人體皮膚、呼吸道、生殖道和消化道）、動(dòng)物源血清及胰酶、消毒不完全的器具，大小只有0.15~0.3μm，所以能通過(guò)一般標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)濾方法，0.22μm過(guò)濾膜。支原體增長(zhǎng)速度相較于細(xì)菌比較緩慢，污染初期（輕微）培養(yǎng)基可能依然清澈不會(huì)變黃，所以輕微污染時(shí)不容易用常規(guī)方法發(fā)現(xiàn)（細(xì)胞外觀觀察或是DNA染色法）確認(rèn)。
支原體污染不但會(huì)緩慢改變細(xì)胞形態(tài)、增殖、基因表達(dá)、蛋白合成及代謝反應(yīng)，它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR、Western Blot或外泌體實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
解決方案：

Biological Industies（BI）可提供：支原體檢測(cè)/處理/預(yù)防全套解決方案

表2.支原體相關(guān)產(chǎn)品列表

中文名稱 貨號(hào) 備注 支原體污染檢測(cè)試劑盒 20-700-20 高敏感性PCR反應(yīng)檢測(cè)方式，明確及快捷 的確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染 支原體污染處理試劑 03-036-1 03-036和03-037需要聯(lián)合使用 03-038單獨(dú)使用，這是兩種不同的處 理支原體污染的途徑，效果也會(huì)有所不同 03-037-1 03-038-1 支原體、細(xì)菌、真菌污染預(yù)防噴霧劑 IC-110100 培養(yǎng)箱和無(wú)菌操作臺(tái)消毒試劑，可有效預(yù)防 微生物的生長(zhǎng)和污染。其成分是可生物降解， 無(wú)毒無(wú)刺激 支原體預(yù)防試劑 01-867-1 即用型的濃縮溶液，50ml Aquaguard-1溶液 加至5L的無(wú)菌水中，每2-4周更換一次培養(yǎng)箱中水 01-916-1 添加在水浴鍋中，高效抗菌性化學(xué)化合物， 可有效殺滅革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌

Dr.Cell可提供：支原體污染檢測(cè)

04  黑膠蟲

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目前科學(xué)界對(duì)黑膠蟲并無(wú)定論，認(rèn)為是不明沉淀現(xiàn)象或多種未知生物污染現(xiàn)象的通稱。
在高倍率顯微鏡頭下，可觀察到各式形狀的小黑點(diǎn)（卵圓狀、球狀、桿狀等）、活躍的布朗運(yùn)動(dòng)及明顯游動(dòng)現(xiàn)象，部分黑膠蟲具有細(xì)胞毒性，可引起細(xì)胞生長(zhǎng)遲緩或裂解凋亡。
解決方案：
Dr.Cell可提供：黑膠蟲樣本鑒定
目前檢測(cè)的黑膠蟲樣本，實(shí)際上62%為細(xì)菌，38%為支原體（如下圖1）

圖1
 

05  病毒

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病毒感染可能來(lái)自宿主動(dòng)物細(xì)胞或病人，病毒感染及傳播具有細(xì)胞專一性，在細(xì)胞培養(yǎng)污染物中是相對(duì)最難檢測(cè)的。然而一旦細(xì)胞遭受污染后顯微鏡下能明顯觀察到細(xì)胞碎片增多、腫大、圓縮、脫落等病態(tài)變形，嚴(yán)重時(shí)會(huì)在單層細(xì)胞上觀察到局部破損空斑。
解決方案：
可選用輻照血清以避免帶進(jìn)任何活的微生物進(jìn)入培養(yǎng)體系。

     
           圖2.Before infection        圖3.After 24 hours infectiond
 

06  細(xì)胞交叉污染

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細(xì)胞株的交叉污染，曾有文獻(xiàn)報(bào)道統(tǒng)計(jì)，目前使用的細(xì)胞株大約有15~20%不是科學(xué)家們所認(rèn)為的細(xì)胞，而在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中，細(xì)胞來(lái)源和細(xì)胞株身份鑒定檢測(cè)觀念普遍缺乏。細(xì)胞株的交叉污染，常在不經(jīng)意的實(shí)驗(yàn)疏失疏忽（不同細(xì)胞株分盤時(shí)，共享一瓶培養(yǎng)基、槍頭、移液管忘記更換，而造成不同細(xì)胞株之間的混合污染，或是實(shí)驗(yàn)操作人員錄入錯(cuò)誤細(xì)胞株名稱，繼代時(shí)的培養(yǎng)皿，冷凍細(xì)胞時(shí)的凍存管）中發(fā)生，而造成錯(cuò)誤后續(xù)數(shù)據(jù)搜集；目前大部分的科學(xué)期刊都已有“細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)論文發(fā)表前，均需附上細(xì)胞鑒定報(bào)告”的規(guī)定（可查閱：文章發(fā)表前要求提供細(xì)胞鑒定的雜志），以此保證數(shù)據(jù)來(lái)源的正確性。

目前常用的細(xì)胞身份驗(yàn)證的方式包括：短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）、同功酶分析、染色體組分型、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（AFLP）的特征分析等方法。其中STR，是目前國(guó)際細(xì)胞庫(kù)（包括：ATCC、DSMZ或是JCRB）常用于細(xì)胞株身份鑒定方法。 
小編溫馨提示，至少每半年一次進(jìn)行細(xì)胞鑒定，當(dāng)然理想情況每2-3個(gè)月鑒定一次，且課題開展前最好先確認(rèn)使用的細(xì)胞身份。
解決方案：
Dr.Cell可提供：
1. 人源細(xì)胞系STR鑒定（STR Authentication）
2. 細(xì)胞物種鑒定（Species Identification）-15種常見模式動(dòng)物的鑒定
 

THE END
您在實(shí)驗(yàn)中有過(guò)這些問(wèn)題嘛？
最后是怎么解決的呢，歡迎大家留言吐槽噢~

好啦，本期介紹就到這里啦，后續(xù)小編會(huì)根據(jù)順序
繼續(xù)為大家分享噢~

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