培養(yǎng)基的保存與使用

液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

要冷藏！因為液體培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時，其溶液的PH值會發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細(xì)胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月至一年。

注意：

• 液體培養(yǎng)基應(yīng)于4℃冰箱避光保存，實驗前需放入37℃預(yù)熱再用。
• 未加血清液體培養(yǎng)基存放期為12個月，加入血清的液體培養(yǎng)及存放期為6個月。

（液體培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解。如果細(xì)胞生長不良，可以再添加適量L-谷氨酰胺。）

液體培養(yǎng)基偶然被凍，可否繼續(xù)使用？ 

如果細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，您應(yīng)該融化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎？ 

大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。

培養(yǎng)基在使用過程中應(yīng)注意的問題： 
（1）培養(yǎng)基在使用前需37℃預(yù)熱或在室溫平衡后再使用。 
（2）細(xì)胞培養(yǎng)過程中，吸取過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，防止殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)基焦化，將有害物質(zhì)帶入培養(yǎng)液中。 
（3）盡量縮短各種液體、細(xì)胞的暴露時間。 
（4）避免液體間、細(xì)胞間的交叉污染。 
（5）配制完全培養(yǎng)基時，配制的量最好在2周內(nèi)用完為好。

關(guān)于培養(yǎng)基中的添加物

為什么有的培養(yǎng)基中要去掉酚紅？

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑，桃紅色表示中性pH，黃色代表酸性pH，紫色表示堿性pH。但是酚紅具有一定的固醇類激素樣的作用，如雌激素樣作用，尤其對于所培養(yǎng)的哺乳類動物細(xì)胞，可能發(fā)生的固醇類反應(yīng)不可忽視。為了避免酚紅干擾檢測結(jié)果，許多研究人員視情況不同來選擇是否使用含酚紅的培養(yǎng)基。

在培養(yǎng)基中加入HEPES有何好處？

培養(yǎng)基中最常用的緩沖體系是碳酸氫鹽，它可提供營養(yǎng)，但卻在生理pH條件下會降低緩沖能力。而HEPES是一種很強(qiáng)的緩沖劑，能使細(xì)胞培養(yǎng)基在pH7.2-7.6條件下緩沖能力增強(qiáng)。

培養(yǎng)基是否要添加L-glutamine（L-谷氨酰胺）？

對于所有的哺乳類動物細(xì)胞而言，L-glutamine（L-谷氨酰胺）是一種必須氨基酸�，F(xiàn)在，所有固體包裝的培養(yǎng)基都含有L-glutamine，因為L-glutamine在溶液中不穩(wěn)定，易分解，商品化的液體培養(yǎng)基不含L-glutamine，如果原來培養(yǎng)基中不含L-glutamine 或者L-glutamine 已經(jīng)降解，應(yīng)在使用培養(yǎng)基之前加入適量的L-glutamine。各種培養(yǎng)基的L-glutamine的濃度是不同的，比如M199含有0.68mM的L-glutamine，DMEM含有4 mM的L-glutamine。

液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用及使用方法。
幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時，細(xì)胞生長不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20 ◦C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ◦C 冰箱儲存兩周以上時，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。

培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？

細(xì)胞通常以葡萄糖作為碳源，丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源。如果沒有足夠的葡萄糖供應(yīng)，細(xì)胞就會選擇丙酮酸鈉作為代謝底物。丙酮酸是糖酵解途徑中一個中間產(chǎn)物，也是EM（Embden Myerhoff）途徑的第一步，所以培養(yǎng)基中添加的丙酮酸既可以作為能量的來源也可以為細(xì)胞的代謝提供碳骨架。

對于某些特殊的細(xì)胞，丙酮酸對維持細(xì)胞的生存是必需的，丙酮酸對于某些細(xì)胞的繁殖和低血清濃度的增殖也是必不可少。

培養(yǎng)基中的丙酮酸鈉濃度一般是0.1 mM，商品化的丙酮酸鈉一般是10 mM (100X)的溶液。