細(xì)胞活性是判斷體外培養(yǎng)細(xì)胞在某些條件下是否能正常生長的重要指標(biāo)，如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養(yǎng)條件變化等。細(xì)胞活性檢測方法有很多種，如臺盼藍(lán)染色法、克�。�集落）形成法、、ATP含量測定法、熒光染色法、比色法（MTT法）等。

一、ATP含量測定法---生物發(fā)光檢測

有研究表明內(nèi)源性三磷酸腺苷 (ATP) 的數(shù)量可以反映細(xì)胞的活性度，內(nèi)源性ATP是活體細(xì)胞最基本的能量來源，細(xì)胞死亡時(shí)，ATP迅速水解。因此，測定細(xì)胞內(nèi)源性ATP的含量可以及時(shí)反映細(xì)胞的活性和活細(xì)胞數(shù)量�；�于ATP的細(xì)胞活力檢測法是一種敏感而可靠的檢測方法。

反應(yīng)原理是活細(xì)胞在有氧和ATP的條件下，熒光酶催化熒光素發(fā)出熒光 (波長為562nm)，強(qiáng)度與ATP含量呈正相關(guān)。故所測得熒光強(qiáng)度可間接反映出存活細(xì)胞量。

Promega CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay是基于ATP檢測的快速細(xì)胞活力檢測法。（目錄號：G7570）

-檢測類型：發(fā)光

-檢測標(biāo)志物：ATP

-應(yīng)用：細(xì)胞活力，細(xì)胞增殖，細(xì)胞毒性

-細(xì)胞類型：細(xì)胞系，原代細(xì)胞(懸浮或貼壁)

-檢測步驟：一步法，均質(zhì)檢測

-操作時(shí)間：10min

-靈敏度：10個(gè)活細(xì)胞(96孔板)   

二、 熒光法檢測

一些熒光染料對死細(xì)胞和活細(xì)胞有不同的作用效果，利用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞活性。如碘化丙錠 (PI) ，被活細(xì)胞排斥但能穿透正在死亡或已經(jīng)死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜，因此活細(xì)胞不被染料染上色，只有死細(xì)胞或是凋亡細(xì)胞才能染上紅色。吖啶橙 (AO) 能透過質(zhì)膜完整的細(xì)胞，嵌入細(xì)胞DNA，使之發(fā)出明亮的綠色熒光。溴化乙錠 (EB) 僅能透過胞膜受損的細(xì)胞，嵌入DNA，發(fā)橘紅色光。也可應(yīng)用AO-EB雙染法鑒定細(xì)胞活性。這種檢測方法相比傳統(tǒng)的染料，具有靈敏度高，操作簡便，結(jié)果容易分辨等特點(diǎn)，而且利用雙染法還可以分辨活細(xì)胞、凋亡早期細(xì)胞、凋亡晚期細(xì)胞、死亡細(xì)胞。在細(xì)胞凋亡的檢測上有很廣泛的應(yīng)用。

Alamar Blue是一種安全、穩(wěn)定、易溶于水、且對細(xì)胞無毒的新型染料，可通過熒光產(chǎn)生或顏色變化指示細(xì)胞的代謝�；罴�(xì)胞線粒體酶能夠?qū)⑺{(lán)色的氧化形式Alamar Blue變成紅色的還原形式，同時(shí)發(fā)生可量化的熒光變化，無活性的細(xì)胞不能還原Alamar Blue 。熒光的強(qiáng)度或紅色的強(qiáng)度反映了細(xì)胞增殖的程度，其顏色變化可用酶標(biāo)儀測定；熒光變化可用熒光測定儀檢測，激發(fā)波長530nm，散射波長590nm，使用熒光方法時(shí)具有更優(yōu)秀的敏感性。AlamarBlue法操作簡便，特異性和靈敏度高，重復(fù)性好，且AIamar Blue的使用不影響細(xì)胞正常代謝及基因表達(dá)，可在無菌條件下測定后繼續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增細(xì)胞，有利于對培養(yǎng)細(xì)胞的連續(xù)監(jiān)測及深入研究。但由于Alamar BIue的分解產(chǎn)物是偏紅色的，所以只能用無酚紅培養(yǎng)基，且對培養(yǎng)的時(shí)間要求也相對MTT法來說要苛刻。

Promega CellTiter-Fluor™ Cell Viability Assay是一種革新性熒光法，是非裂解性的活細(xì)胞檢測法，用于檢測活細(xì)胞的活力狀態(tài)和數(shù)量。（目錄號G6080）

原理：該系統(tǒng)檢測的是活細(xì)胞內(nèi)的蛋白酶活性，該蛋白酶為保守的組成型蛋白，因而可作為細(xì)胞活力的生物標(biāo)志物。該活細(xì)胞蛋白酶活性僅與完好的活細(xì)胞有關(guān)，是通過一種可穿透細(xì)胞膜的、可產(chǎn)生熒光的肽底物（Gly-Phe-AFC）來檢測的。該底物進(jìn)入活細(xì)胞后，被活細(xì)胞蛋白酶切割，產(chǎn)生熒光信號，該信號的強(qiáng)度與活細(xì)胞數(shù)量相關(guān)。當(dāng)細(xì)胞膜的完整性喪失，以及漏出到周圍培養(yǎng)基后，該活細(xì)胞蛋白酶的活性即消失。

-檢測標(biāo)志物：活細(xì)胞蛋白酶

-檢測類型：熒光(380-400nm激發(fā)光/505nm發(fā)射光)

-應(yīng)用：細(xì)胞活力，細(xì)胞增殖，細(xì)胞毒性，疊加檢測

-細(xì)胞類型：細(xì)胞系，原代細(xì)胞(懸浮或貼壁)

-檢測步驟：一步法，均質(zhì)檢測

-操作時(shí)間：0.5-3h

-靈敏度：40個(gè)活細(xì)胞(96孔板)

三、 比色法檢測

MTT比色分析法是由Mosmann在1983年首創(chuàng)，其原理是活細(xì)胞內(nèi)的線粒體中的琥珀酸脫氫酶可以將MTT[化學(xué)名為3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2, 5-二苯基四氮唑溴鹽，外觀淡黃色]還原成藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜，并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜 (DMSO) 能溶解細(xì)胞中的甲臜，溶液顏色的深淺與所含的甲臜量成正比。用酶標(biāo)儀在570nm波長下測定OD值。MTT方法能簡單、快捷、準(zhǔn)確地測定細(xì)胞的增殖反應(yīng)，而且能避免由于人為操作因素造成的試驗(yàn)誤差，大大地提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。MTT方法目前大多用于檢測培養(yǎng)細(xì)胞的生長和增殖、新藥篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)、腫瘤細(xì)胞敏感性試驗(yàn)等。加之其價(jià)格低廉，成為日前各實(shí)驗(yàn)室榆測細(xì)胞活性的首選方法之一。

但是MTT法不太適合于懸浮細(xì)胞，因?yàn)樵谌芙饧着H之前，需將培養(yǎng)液吸出，這一步很容易造成甲臜流失，因而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。若不去除培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的血清和酚紅會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。為了消除培養(yǎng)液中血清和酚紅的影響，有人進(jìn)一步提出改良的MTT法。即在不吸出培養(yǎng)基的前提下，利用一些有機(jī)溶劑，如酸化SDS、SDS-DMF酸性溶解液等直接溶解甲臜，都取得了不錯(cuò)的效果。

對由于MTT的產(chǎn)物甲臜不溶于水的缺點(diǎn)，研究人員又開發(fā)了很多種水溶性的四氮唑鹽類：如 XTT、CCK-8 (又稱WST-8) 等。XTT和CCK-8都是新合成的四唑氮衍生物，與MTT屬于同類物質(zhì)，它們都能被活細(xì)胞中線粒體內(nèi)的脫氫酶降解而產(chǎn)生棕黃色水溶性的甲臜，能直接通過光譜吸收測定OD值，進(jìn)而推測細(xì)胞的增殖情況。當(dāng)與電子耦合劑PMS聯(lián)用時(shí)，還能增強(qiáng)其還原反應(yīng)，提高反應(yīng)的靈敏性。與MTT法比較可知，這些方法主要優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)產(chǎn)物為水溶性，不需要使用裂解液溶解沉淀，也不需要吸取上清，對貼壁和懸浮生長的細(xì)胞均適用，檢測時(shí)間縮短和處理步驟減少，也大大提高了實(shí)驗(yàn)的敏感性。缺點(diǎn)就是成本較高，XTT水溶液不穩(wěn)定，需要低溫保存或現(xiàn)配現(xiàn)用；而CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，不注意的活容易產(chǎn)生漏加或多加。

Promega CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS單溶液一步法細(xì)胞活力檢測試劑盒)是一種比色法的新型細(xì)胞活力快速檢測試劑。一步法操作，擺脫了傳統(tǒng)MTT操作復(fù)雜問題，誤差小，無需有機(jī)溶劑溶解，無需去除上清，活細(xì)胞檢測等。（目錄號G3582 G3580 G3581 ）

-檢測類型：吸收光(490nm)

-檢測標(biāo)志物：線粒體脫氫酶

-應(yīng)用：細(xì)胞活力，細(xì)胞增殖，細(xì)胞毒性

-細(xì)胞類型：細(xì)胞系，原代細(xì)胞(懸浮或貼壁)

-檢測步驟：一步法，均質(zhì)檢測

-操作時(shí)間：1-4h

-靈敏度：1000個(gè)活細(xì)胞(96孔板)