常見細(xì)胞增殖檢測方法總結(jié)
瀏覽次數(shù):6606 發(fā)布日期:2015-10-10
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常見細(xì)胞增殖檢測方法總結(jié)
細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征,細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物,以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細(xì)胞生物,以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞,用來補(bǔ)充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞;同時,多細(xì)胞生物可以由一個受精卵,經(jīng)過細(xì)胞的分裂和分化,最終發(fā)育成一個新的多細(xì)胞個體。必須強(qiáng)調(diào)指出,通過細(xì)胞分裂,可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì),平均地分配到兩個子細(xì)胞中去?梢姡(xì)胞增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。
一、MTT
又稱MTT比色法,是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
缺點:由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物不溶于水,需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響,而且溶解甲瓚的有機(jī)溶劑對實驗者也有損害。
產(chǎn)品訂購信息:
二、CCK-8
Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深;細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。
CCK-8的原理跟MTT其實是相同的,不同之處在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的,不需要再吸出培養(yǎng)液加入有機(jī)溶劑溶解這個步驟,因此可以減少一定的誤差。其他優(yōu)點就是重復(fù)性優(yōu)于MTT;對細(xì)胞毒性。粸1瓶溶液,不需預(yù)制,即開即用。
產(chǎn)品訂購信息:
產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
包裝規(guī)格 |
CK04-500 |
Cell Counting Kit-8 |
500tests |
CK04-100 |
Cell Counting Kit-8 |
100tests |
三、BrdU
Brdu,即5-Bromo-2'-Deoxyuridine,中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加入,而后利用抗Brdu單克隆抗體,ICC染色,顯示增殖細(xì)胞。同時結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物,雙重染色,可判斷增殖細(xì)胞的種類,增殖速度,對研究細(xì)胞動力學(xué)有重要意義。
但由于抗體分子量大,難于摻入并被有效檢測,因此BrdU檢測需采用DNA酶或HCl或加熱使DNA變性;這些處理方法會破壞抗原識別位點,此外許多細(xì)胞周期分析的染料都需要dsDNA,這種處理方法也使得同一樣本無法同時進(jìn)行細(xì)胞周期分析。對于植物細(xì)胞等有細(xì)胞壁的分析,采用抗體檢測還需要消化細(xì)胞壁,細(xì)胞壁消化酶常含有一些雜質(zhì),會導(dǎo)致檢測的可靠性降低,同時BrdU檢測則需要進(jìn)行長時間的孵育--幾個小時甚至過夜。
產(chǎn)品訂購信息:
產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
包裝規(guī)格 |
559619 |
FITC BrdU Flow Kit |
50tests |
552598 |
APC BrdU Flow Kit |
50tests |
K306-200 |
|
200tests |
四、EdU
EdU(5-Ethynyl-2’- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細(xì)胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子中,通過基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測細(xì)胞DNA復(fù)制活性,適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面的研究,尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。
與BrdU檢測方法相比,EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU染料只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免樣品損傷,而且無需抗原抗體反應(yīng),能在細(xì)胞和組織水平更準(zhǔn)確地反映DNA復(fù)制活性。
其他增殖檢測訂購信息:
產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
包裝規(guī)格 |
K305-1000 |
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1000tests |
K300-500 |
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500tests |
K303-500 |
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500tests |
K302-500 |
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500tests |
K301-500 |
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500tests |
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