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                                當前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > Taq DNA聚合酶(with MgCl2 in Buffer)使用說明書

                                Taq DNA聚合酶(with MgCl2 in Buffer)使用說明書

                                瀏覽次數(shù):3886 發(fā)布日期:2014-7-3  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負
                                『注意事項』
                                1.    長期儲存(非頻繁使用)于-70ºC;每天或每周使用儲存于-20ºC。盡量避免多次凍融,勿暴露在溫度波動較大之處,這些波動對產(chǎn)品的穩(wěn)定性有一定影響。
                                2.    建議在100l反應液中,酶的使用量為1~2.5l。過多酶量和過長的延伸時間可能會引起非特異擴增條帶。
                                3.    為確保實驗結(jié)果,建議使用本公司配套緩沖液及相關(guān)試劑。
                                4.    擴增結(jié)果與反應體系、Mg2+濃度、引物、循環(huán)參數(shù)等因素有關(guān)。為了減少不必要的優(yōu)化過程、節(jié)省時間和保證試驗結(jié)果的穩(wěn)定可重復,推薦使用本公司的PCR SmartMix。

                                產(chǎn)品編號:TQ-01/02/03/04

                                MyLab® Taq DNA聚合酶
                                (with MgCl2 in Buffer)

                                使用說明書
                                『規(guī)格』5U/l; 100l; 500U。
                                『特點』
                                本制品是分子量為94 kDa的耐熱的DNA聚合酶。是將棲熱水生菌(Thermus aquaticus)DNA Polymerase的基因克隆后,在大腸桿菌中表達后,分離純化而得到的。它與天然的Taq DNA聚合酶有相同的功能。該酶反應需Mg2+參與,它以雙鏈DNA為模板催化核苷酸從5’向3’末端形成雙鏈DNA。該酶不具有5’-3’核酸外切酶的活性。該產(chǎn)品主要用于DNA的PCR擴增,DNA測序等。PCR產(chǎn)物3' 端為A,可用于T/A克隆。在70~75ºC時,DNA聚合的速度每秒大于75個堿基。
                                『組成』
                                Taq DNA Polymerase: 500U (5U/l; 200l)
                                10 PCR Buffer: 1.5ml,組份為:
                                100 mM Tris-HCl (pH8.7)
                                500 mM KCl
                                15 mM MgCl2
                                0.1%白明膠
                                其它穩(wěn)定劑和增強劑
                                『活性單位』
                                1單位酶定義為在72ºC、30min內(nèi)催化10nmol同位素標記的dNTP加入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。
                                『保存條件』-20℃保存。
                                『有效期』12個月。

                                『質(zhì)量控制』
                                1.    Overdigest (OD) 檢測:30U Taq DNA 聚合酶與1g λDNA在72ºC下反應16小時后,用瓊脂糖凝膠電泳未檢出降解的λDNA。
                                2.    切口酶檢測:30U Taq DNA 聚合酶與超螺旋質(zhì)粒DNA在72ºC下反應4小時后,用瓊脂糖凝膠電泳未檢出切口酶或線性DNA帶。
                                3.    熱穩(wěn)定性檢測:92ºC時,每2.5U Taq DNA 聚合酶在緩沖液中的半衰期長于1小時。
                                4.    SDS-PAGE檢測純度大于99%以上。
                                『適用范圍』
                                常規(guī)PCR/反轉(zhuǎn)錄PCR/熒光定量PCR/DNA測序/平端PCR產(chǎn)物加A等。
                                『使用方法』
                                注意:以下舉例多數(shù)情況下可參考。實際反應條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異,需根據(jù)實際情況,設定最佳反應條件。
                                以人基因組DNA 為模板,擴增1kb的片段,反應體系為25l。
                                10PCR Buffer              2.5l
                                Primer 1 (10M)              1l
                                Primer 2 (10M)              1l
                                dNTP (10mM)                0.5l
                                Taq DNA Polymerase        1~2.5U
                                Template                    1g
                                ddH2O                      補至25l
                                如反應體系不同,可按此比例增加或減少用量;靹蚝,置于PCR儀中,按設定的程序運行即可。反應結(jié)束后取5l反應產(chǎn)物,瓊脂糖凝膠電泳檢測。
                                本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床治療、食品等用途。

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