基本原理

斑點金免疫滲濾測定法是在斑點免疫滲濾測定法基礎(chǔ)上，改用膠體金標記物代替酶，省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑及標本滴加在膜上，通過滲濾而逐步反應。全過程可于數(shù)分鐘內(nèi)完成，陽性結(jié)果在膜上呈紅色斑點。

試劑及材料

1. 滲濾裝置：為一塑料小盒（4x3x0.6cm），分為底、蓋兩層，蓋的中央有一個直徑0.5cm的小孔。盒底充填吸水性較強的墊料，蓋孔下，緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋，即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點加1-2ml特異性抗體(一抗)或抗原，室溫自然干燥，保存于放干燥劑的密封塑料袋中備用。

2. 封閉液：含0.2%BSA和0.05%吐溫-20的洗滌液。

3. 洗滌液：50mol/L，pH7.2 PBS。

4. 特異性抗體(一抗)或抗原

5. 金標抗體

操作方法

1. 取出滲濾器，先在小孔的NC膜上，滴加2滴（約100ml）封閉液；

2. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，加待檢標本1滴（約50ml）；

3. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，滴加2滴（約100ml）洗滌液；

4. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，加金標抗體1滴（約50ml），使其與NC膜上吸附的檢品發(fā)生反應；

5. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，滴加2滴（約100ml）洗滌液；

6. 至洗滌液完全滲入盒內(nèi)

結(jié)果觀察

在小孔NC膜上出現(xiàn)紅色反應時為陽性反應，陰性反應不著色。

注意事項

1. 特異性抗體(一抗)或抗原、待檢標本和金標抗體的用量事先都必須應用方陣法確定最適用量。

2. 盒底充填的墊料吸水性要強，否則影響結(jié)果。