泌乳素(PRL) ELISA試劑盒使用說明

(德國DRG：EIA1291)

1、實驗原理

   DRG公司的泌乳素酶免實驗是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實驗（ELISA）。反應板上的微檢測孔包被有能結(jié)合泌乳素分子上獨特抗原位點的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性泌乳素的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進行孵育，該酶聯(lián)物是一種聯(lián)結(jié)有辣根過氧化物酶的抗泌乳素抗血清。孵育后，用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。結(jié)合上的辣根過氧化物酶的總量與樣本中泌乳素的濃度成正相關。加入底物溶液后，顯出的顏色強度與病人樣品中泌乳素的濃度成正比。

2、試劑盒成分

1)       微量反應板，1塊 ( 96孔) ，微孔中包被了抗泌乳素的單克隆抗體。

2)       酶聯(lián)物，11ml，辣根過氧酶標記的泌乳素抗血清。 

3)       底物液，11ml (TMB)

4)       標準系列，6支（凍干粉），濃度：0；5；20；50；100；200ng/ml

轉(zhuǎn)換系數(shù)（1ng/ml=21.1mUI/mL）

5)       終止液，0.5M的 H2SO4，6ml

3、實驗需要器材（但試劑盒不提供）

1)       酶標儀(450±10nm)。

2)       移液器

3)       吸水紙

4)       標準水箱

5)       蒸餾水

6)       計時器

4、試劑貯存:

   未開啟的試劑在2—8℃下貯存，在有效期內(nèi)可以保持活性。不要使用過期試劑，酶聯(lián)物、底物溶液、標準品和零標準品必須在2—8℃下貯存。

   微孔反應板必須在2—8℃下貯存。一旦包裝袋被打開，必須將它小心地嚴封起來。如果包被板的包裝被打開，其免疫活性在2個月內(nèi)穩(wěn)定，但前提是必須將它密封在裝有干燥劑的袋子里。

5、樣品的采集

1)       靜脈穿刺采集全血，待其凝血，在室溫下用離心機分離血清，避免溶血。注意：此試劑盒只能使用沒用任何添加劑的樣品。

2)       必須蓋住樣本并在實驗之前于２-８℃下可貯存48小時。樣品需要更長的貯存時間，則應將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下。解凍的樣本在檢測之前必須上下倒置幾次。

注意：用于此試劑盒的樣品不能含有任何添加劑。

6、試劑的準備

參考標準：在凍干的標準品中加入1.0ml雙蒸水。

注：配制好了的標準品可在2-8℃下穩(wěn)定存放2個月。想要存放更長時間應當將其凍存于-20℃的環(huán)境下。

7、一般注意事項

1)       實驗開始前，將所有試劑和樣本都平衡至室溫,試劑混合時避免起泡。

2)       實驗一旦開始,所有的步驟應完整地進行下去。

3)       每一樣品的取樣都得使用新的取樣吸頭。

4)       吸光度與溫育時間和溫度有關，在實驗開始后所有的試劑都應準備好，以保證加液時間的一致。

5)       本試劑盒最大吸光度(OD)在1.200-2.000之間(室溫22℃,顯色10分鐘以內(nèi))。如果最大OD值高于您酶標儀的上限或低于1.000，則相應的減少或延長顯色反應的溫育時間。一般情況下，酶免反應的強度與時間和溫度成線性，這使得操作者應當適當?shù)恼{(diào)整物理化學環(huán)境。

8、實驗步驟

1)       將所需數(shù)目的板條置于板架上。

2)       將黃體生成素標準系列(0；5；20；50；100；200ng/ml)、質(zhì)控和血清樣本分別25μl加入到相應的微孔中，每一樣品都得使用新的取樣吸頭。

3)       加100μl的抗泌乳素酶聯(lián)物于各孔中。

4)       混勻10秒,此步驟中完全混勻很重要。

5)       室溫溫育(22℃)30分鐘。

6)       棄去孔內(nèi)的反應液。

7)       用蒸餾水洗板5次。

8)       在吸水紙上把板拍干。

9)       依原先加樣順序,每孔加100μl底物液。

10)   室溫(22℃)溫育10分鐘。

11)   按加底物液順序,每孔加50μl終止液于各孔中。

12)   10分鐘內(nèi)在450±10nm波長讀吸光度。

9、結(jié)果計算

1)       計算每個標準品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。

2)       用吸光度值作為縱坐標（y），濃度值作為橫坐標（x），以每個標準品的吸光度值對其相應的濃度值（mIU/ml）進行標繪，作一條標準曲線。

3)       用每一樣品的平均吸光度值在標準曲線上確定其相應的濃度。根據(jù)自己的實際經(jīng)驗或計算機的功能，也可以采用其它的歸納方法進行計算。

4)       如果樣本的濃度高于最高濃度的標準品的濃度或者濃度＞200ng/ml，則需要進行稀釋，任何稀釋了的樣品在計算時都必須將相應的稀釋因子考慮進去。

10、參考值

我們強烈建議各個實驗市都建立自己的正常值和異常值。以下結(jié)果是以一定量正常人群的血液樣本為準得出的實驗結(jié)果：

靈敏度: 最小檢測出的泌乳素濃度為0.35ng/ml

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。

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