隨著科學(xué)的進(jìn)步，由于傳統(tǒng)細(xì)胞體外培養(yǎng)的局限性，類(lèi)器官細(xì)胞培養(yǎng)在臨床研究中的應(yīng)用越來(lái)越多，NEST整合公司多方資源，致力于為客戶(hù)提供類(lèi)器官培養(yǎng)最前沿的產(chǎn)品管線和技術(shù)服務(wù)。
 

其中GelNest™基質(zhì)膠在體外3D培養(yǎng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。

GelNest™基質(zhì)膠主要是模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，可以有效促進(jìn)正常細(xì)胞、轉(zhuǎn)染細(xì)胞、貼壁生長(zhǎng)的上皮細(xì)胞等細(xì)胞的粘附和分化，包括神經(jīng)細(xì)胞，肝細(xì)胞，動(dòng)物上皮細(xì)朐及黑素瘤等，能夠提高細(xì)胞培養(yǎng)的成功率和效果。同時(shí)在類(lèi)器官培養(yǎng)、類(lèi)器官藥物敏感實(shí)驗(yàn)以及Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)都發(fā)揮著重要的作用。

01

GelNest™基質(zhì)膠成分解讀

1. GelNest™基質(zhì)膠中含有DNA或RNA嗎？
含有，GelNest™基質(zhì)膠沒(méi)有經(jīng)過(guò)DNase或RNase消化處理，可能會(huì)含有痕量的DNA、RNA。此外，因?yàn)榛�質(zhì)膠中含有痕量的RNA，進(jìn)行RNA分析時(shí)，應(yīng)設(shè)一個(gè)GelNest™基質(zhì)膠(不接種細(xì)胞的對(duì)照組)。

2.  GelNest™基質(zhì)膠中含有血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和金屬蛋白酶(MMPs)嗎？
標(biāo)準(zhǔn)型的GelNest™基質(zhì)膠中含有5.0-7.5ng/ml的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)；

低生長(zhǎng)因子的GelNest™基質(zhì)膠中的VEGF含量為1.0-1.5ng/mL；

另外，GelNest™基質(zhì)膠中可能還含有小鼠腫瘤細(xì)胞來(lái)源的痕量的金屬蛋白酶(MMPs)。

3. GelNest™基質(zhì)膠中含有LDEV嗎？
不含。GelNest™基質(zhì)膠經(jīng)免疫方法及PCR方法檢測(cè)，并不含有乳酸脫氫酶增高病毒(LDEV)或者乳酸脫氫酶增生病毒(LDHV)，同時(shí)也未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌、真菌和支原體。

4.  GelNest™基質(zhì)膠含中有尿素嗎？
不含。

5.  GelNest™基質(zhì)膠中使用的什么緩沖液？
低糖DMEM (1g/L)，其中包含50µg/mL慶大霉素。

6.  GelNest™基質(zhì)膠中含有纖維連接蛋白嗎？
經(jīng)Western Blot檢測(cè)，在GelNest™基質(zhì)膠中發(fā)現(xiàn)了微量的纖維連接蛋白。

7.  GelNest™基質(zhì)膠中含有玻璃體結(jié)合蛋白嗎？
某些組織中可能含有微量的血液，因此GelNest™基質(zhì)膠中可能會(huì)有痕量的玻璃體結(jié)合蛋白。

8.  GelNest™基質(zhì)膠中還有什么別的物質(zhì)？
GelNest™基質(zhì)膠中還可能含有濃度小于0.02%的三氯甲烷，以及腫瘤細(xì)胞的產(chǎn)生的其它未知蛋白或分子。

近20年，基質(zhì)膠被廣泛的應(yīng)用于細(xì)胞分化、血管形成和腫瘤生長(zhǎng)有關(guān)的研究，建立了許多的細(xì)胞分化模型、血管生成和腫瘤惡性程度相關(guān)檢測(cè)方法。當(dāng)細(xì)胞分化后，可以將其移植回動(dòng)物，替代病變或缺損的組織。未來(lái)基質(zhì)膠在體新型類(lèi)器官模型構(gòu)建、體外腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性研究及其他細(xì)胞方面的應(yīng)用也一定會(huì)越來(lái)越廣泛。GelNest™基質(zhì)膠特別是在組織工程、細(xì)胞培養(yǎng)和研究等方面，可被用于類(lèi)器官培養(yǎng)、干細(xì)胞分化、血管生成、遷移或侵襲和體內(nèi)腫瘤發(fā)生等研究。

 

02

GelNest™基質(zhì)膠應(yīng)用指導(dǎo)

1. 什么情況下需要使用不含酚紅的GelNest™基質(zhì)膠？
對(duì)于涉及顏色檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)，推薦使用不含酚紅的GelNest™基質(zhì)膠，如使用熒光染料對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞成管的定量；

對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)必須使用不含酚紅的GelNest™基質(zhì)膠。

不含酚紅的GelNest™基質(zhì)膠也可以應(yīng)用于一些體內(nèi)應(yīng)用研究。因酚紅與一些非甾體雌激素結(jié)構(gòu)相似，有顯著的雌激素活性，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)可能具有干擾內(nèi)分泌與荷爾蒙代謝的能力。此外，酚紅是一種潛在的內(nèi)分泌干擾物，有可能會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)激素的自然產(chǎn)生和代謝能力。

2. 高濃度GelNest™基質(zhì)膠可以用于哪些實(shí)驗(yàn)？
高濃度GelNest™基質(zhì)膠可用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)等體內(nèi)應(yīng)用研究。高濃度GelNest™基質(zhì)膠的蛋白濃度高，和腫瘤細(xì)胞一起皮下注射到小鼠體內(nèi)后保持其完整性并保持原位，以便進(jìn)行原位分析或未來(lái)腫瘤的取樣。

3. 哪些情況下應(yīng)該選用薄膠法/厚膠法？3D細(xì)胞培養(yǎng)有哪些應(yīng)用？
薄膠法主要用于細(xì)胞貼壁和增殖，如原代細(xì)胞培養(yǎng)僅需要一層薄薄的蛋白層輔助而非蛋白基質(zhì)；

厚膠法主要用于3D細(xì)胞培養(yǎng)，成環(huán)試驗(yàn)，如大鼠主動(dòng)脈組織分化為毛細(xì)管樣結(jié)構(gòu)，以及進(jìn)行細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)等。

3D細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，主要是用于研究細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用以及復(fù)雜結(jié)構(gòu)等。

4. GelNest™基質(zhì)膠可以用于誘導(dǎo)ES/iPS細(xì)胞分化的研究嗎？
可以，實(shí)驗(yàn)表明GelNest™基質(zhì)膠可以用于ES/iPS細(xì)胞的分化研究，建議使用干細(xì)胞專(zhuān)用的GelNest™基質(zhì)膠。

5. 如何從GelNest™基質(zhì)膠中收獲細(xì)胞？
推薦使用中性蛋白酶，如分散酶來(lái)收獲培養(yǎng)在GelNest™基質(zhì)膠中的細(xì)胞。

中性蛋白酶相比胰蛋白酶、膠原蛋白酶或其它蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細(xì)胞懸液，不會(huì)損傷細(xì)胞或分裂細(xì)胞表面蛋白。對(duì)于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或生物檢測(cè)的細(xì)胞，使用中性蛋白酶不會(huì)產(chǎn)生損傷，此外中性蛋白酶也可以用于組織的分離。

也可使用相應(yīng)的細(xì)胞復(fù)蘇溶液進(jìn)行代謝實(shí)驗(yàn)和RNA回收實(shí)驗(yàn)，建議在4℃使用細(xì)胞復(fù)蘇溶液進(jìn)行非酶反應(yīng)的細(xì)胞收獲。
其它方法：降低溫度至4-6℃使基質(zhì)膠解聚，這需要一定的時(shí)間并且僅適合一部分應(yīng)用；或者離心以破壞基質(zhì)膠結(jié)構(gòu)。

6. 使用GelNest™基質(zhì)膠培養(yǎng)的細(xì)胞，如果需要進(jìn)行切片或者免疫組織化學(xué)及免疫熒光檢驗(yàn)，該怎樣固定呢？如何避免解聚？
可以使用2-4%多聚甲醛進(jìn)行固定，如2-4%多聚甲醛配制在PBS中，室溫固定20分鐘。某些情況下，在固定后可能出現(xiàn)解聚的情況，可以加入1%戊二醛(戊二醛作為固定劑，常用于電鏡檢測(cè))。

如果需要進(jìn)行免疫熒光檢驗(yàn)，加入戊二醛后，會(huì)出現(xiàn)明顯的背景熒光。為了解決這一問(wèn)題，建議操作中在固定之后，使用NaBH4進(jìn)行淬滅。NaBH4極易起泡，進(jìn)行該步驟時(shí)，必須在水平操作臺(tái)上小心操作，避免晃動(dòng)，盡量減少氣泡的形成。另外，也可以嘗試使用較低濃度(如0.1%到0.5%)的戊二醛進(jìn)行固定，濃度越低，背景熒光信號(hào)越少。

7. 提取過(guò)程會(huì)引起層粘連蛋白變性嗎？
不會(huì)引起層粘連蛋白變性。

注：NEST提供的各種基質(zhì)膠應(yīng)用方案僅供參考，實(shí)際須根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行條件的優(yōu)化。

 

03

GelNest™基質(zhì)膠產(chǎn)品推薦