1. 多肽純度和多肽含量的區(qū)別     
在我們使用多肽的過程中，我們經(jīng)常會(huì)遇到多肽純度和多肽含量這兩個(gè)指標(biāo)，而很多小伙伴可能會(huì)有這樣的疑問，為什么我們的多肽純度是95%，但是肽含量卻只有80%呢？因?yàn)�，這個(gè)是兩個(gè)完全不同的概念。

多肽純度：多肽的純度是指使用HPLC分析法在214nm(214nm是肽鏈的吸收波長(zhǎng))處檢測(cè)到的目標(biāo)多肽的含量；

多肽含量：是指樣品中肽類物質(zhì)相對(duì)于非肽類物質(zhì)所占的百分比；
多肽的純度是指使用HPLC分析法在214nm(214nm是肽鏈的吸收波長(zhǎng))處檢測(cè)到的目標(biāo)多肽的含量；除了目標(biāo)多肽外，HPLC還可以檢測(cè)到的雜質(zhì)包括：缺失序列（缺失了一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的靶序列），截?cái)嘈蛄校�加保護(hù)過程中產(chǎn)生的序列）以及脫保護(hù)不完全序列（產(chǎn)生于整個(gè)合成過程或最后的裂解過程）等；但是，HPLC檢測(cè)不到水和殘留的鹽份如三氟乙酸鹽，醋酸鹽等，而在多肽合成過程中，多肽是通過三氟乙酸將肽序從樹脂上切割下來(lái)的，而且在純化過程中也會(huì)產(chǎn)生少量的TFA，因此，多肽游離的氨基末端和其他側(cè)鏈如Arg、Lys、His都可生成少量TFA雜質(zhì)；還有一個(gè)就是水分，多肽通常采用凍干法脫水，即使如此，水也會(huì)因共價(jià)結(jié)合的能力不同而不同程度地存在著，因此，通常交付的多肽中，通常都含有TFA鹽和微量的水分，而這些都是HPLC檢測(cè)不出來(lái)的，因此，導(dǎo)致了肽含量和肽純度的不同。

我們知道，多肽純度是用HPLC分析法檢測(cè)得到的，那么肽含量又是如何檢測(cè)的呢？通常，肽含量通過氨基酸組分分析或紫外分光法測(cè)定的。這個(gè)信息主要是在一些對(duì)肽的濃度很敏感的實(shí)驗(yàn)中，對(duì)計(jì)算肽的濃度是很重要的。

2. DMSO在多肽溶解中的使用及細(xì)胞毒性耐受建議
在我們?nèi)芙舛嚯牡臅r(shí)候，經(jīng)常會(huì)遇到一些疏水性序列，這就導(dǎo)致了多肽很難以我們想要的濃度溶解于水中，這個(gè)時(shí)候，我們可以考慮使用DMSO。

DMSO（二甲基亞砜）是一種含硫有機(jī)化合物，分子式為（CH3)2SO，常溫下為無(wú)色無(wú)臭的透明液體。DMSO作為冷凍保護(hù)劑經(jīng)常應(yīng)用于細(xì)胞庫(kù)。在細(xì)胞冷凍過程中，DMSO可防止胞內(nèi)/胞外晶體的形成，其工作濃度為10%。DMSO通常可與鹽或血清白蛋白結(jié)合。

疏水性多肽可以很容易地溶解在DMSO中。但DMSO可增加細(xì)胞的通透性，若多肽溶解于DMSO中則會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。高濃度的DMSO絕不可應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)中。這個(gè)時(shí)候，我們可以考慮控制溶液中DMSO的溶度。通常，濃度為5%的DMSO即可讓細(xì)胞膜溶解。大多數(shù)細(xì)胞株可以容忍0.5% DMSO，少許可以容忍1%的濃度，而不表現(xiàn)出嚴(yán)重的細(xì)胞毒性。然而原代細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)其更敏感。所以如果是用原代細(xì)胞做劑量/反應(yīng)曲線(可行性)，其濃度應(yīng)低于0.1%。

下面是我們對(duì)于細(xì)胞對(duì)DMSO毒性耐受性的一些經(jīng)驗(yàn)：
          • 對(duì)幾乎所有的細(xì)胞來(lái)說(shuō)，濃度為0.1%DMSO是安全的。
          • 廣泛被用于細(xì)胞培養(yǎng)的DMSO終濃度為0.5%，不會(huì)引起細(xì)胞毒性。
          • 雖然對(duì)部份細(xì)胞來(lái)說(shuō)，1%DMSO也不會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性，但我們推薦0.5%。
          • 也有5%DMSO成功地應(yīng)用于某些細(xì)胞的案例。
          • 始終保持終濃度在0.5%，但儲(chǔ)存時(shí)可200倍高濃度溶于100%的DMSO中。

對(duì)于某些疏水性非常高的多肽，可先嘗試將其溶解在少量的DMSO(30-50ul,100%)中，然后慢慢 (一滴一滴地)將其添加到不斷攪拌的水溶液如PBS或其他想要的緩沖液中，直至理想濃度。如果滴加過程中，肽溶液開始變渾濁，說(shuō)明已經(jīng)達(dá)到了溶解極限。另外，還可以嘗試使用超聲波幫助多肽溶解。