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常見(jiàn)蛋白純化方法及全能核酸酶在解決核酸殘問(wèn)題中的優(yōu)勢(shì)

瀏覽次數(shù):227 發(fā)布日期:2024-12-20  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
一、蛋白純化知多少:常見(jiàn)蛋白純化方法概覽
  1. 親和層析,是一種利用分子與其配體間特殊的、可逆性的親和結(jié)合作用而進(jìn)行分離的層析技術(shù)。比如酶與底物、抗原和抗體之間專(zhuān)一的相互作用等,將其一作為配基固定在填料上,就可以從初始樣品中吸附相應(yīng)的生物分子,然后通過(guò)合適的洗脫將其解離達(dá)到純化的目的。
  2. 凝膠過(guò)濾,也叫分子排阻層析,是利用帶孔凝膠珠作基質(zhì),按照分子大小分離蛋白質(zhì)或其它分子混合物的層析技術(shù)。它還廣泛地應(yīng)用于分離、提純、濃縮生物大分子及脫鹽、去熱源等,測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量也是它的重要應(yīng)用之一。
  3. 鹽析也是蛋白質(zhì)分離純化中經(jīng)常使用的方法,其原理是增加中性鹽濃度使蛋白質(zhì)、氣體、未帶電分子溶解度降低。
  4. 聚丙烯酰胺凝膠電泳同樣是常用的方法之一,主要用于分離蛋白質(zhì)和寡糖核苷酸。

這些不同的蛋白純化方法各有特點(diǎn),在實(shí)際應(yīng)用中往往需要根據(jù)具體的需求和蛋白的特性等因素來(lái)選擇使用或者聯(lián)合使用。

二、全能核酸酶大揭秘
(一)全能核酸酶的基本特性
全能核酸酶,又稱(chēng)廣譜核酸酶、超級(jí)核酸酶或活性核酸酶,是一種來(lái)源于粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)的非特異性核酸內(nèi)切酶。
(二)全能核酸酶的作用原理
全能核酸酶對(duì)核酸進(jìn)行降解的原理是通過(guò)其特定的酶活性作用于核酸分子內(nèi)部的磷酸二酯鍵。它作為一種內(nèi)切酶,能夠識(shí)別并結(jié)合到核酸鏈上,然后在鏈內(nèi)合適的位置進(jìn)行切割,不管是 DNA 還是 RNA,也無(wú)論它們呈現(xiàn)出何種具體的結(jié)構(gòu)形態(tài),如雙鏈的穩(wěn)定結(jié)構(gòu),或是單鏈的相對(duì)靈活形態(tài),亦或是環(huán)狀、線(xiàn)狀等不同拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),實(shí)現(xiàn)諸如降低溶液粘度、去除核酸干擾等一系列在蛋白純化等應(yīng)用場(chǎng)景中所需要達(dá)成的目的。

三、全能核酸酶在蛋白純化中的應(yīng)用場(chǎng)景
  1. 重組蛋白純化時(shí)去除核酸污染
  2. 配合裂解液提升蛋白產(chǎn)量
  3. 在病毒載體制備中確保核酸去除
  4. 防止外周血單細(xì)胞結(jié)塊現(xiàn)象

逐典生物依托重組蛋白定向改造平臺(tái),基于AI酶進(jìn)化能力,成功開(kāi)發(fā)多款全能核酸酶,酶活性高,終產(chǎn)物回收率高,能夠特異性適配不同應(yīng)用場(chǎng)景,在病毒純化、疫苗生產(chǎn)、蛋白和多糖類(lèi)制藥工業(yè)作為宿主殘留核酸去除試劑,有效去除宿主殘留核酸,保證生物制品功效及安全性。

產(chǎn)品特點(diǎn)
  1. 高酶活性:中、高鹽緩沖液條件下,酶活性高
  2. 高回收率:高鹽環(huán)境下減少核酸纏繞病毒或目的蛋白,降低AAV等病毒顆粒聚集,提高目的產(chǎn)物回收率
  3. 高工藝簡(jiǎn)便性:下游收獲或純化無(wú)需超濾換液或透析脫鹽

性能驗(yàn)證數(shù)據(jù)
  • Pannarase全能核酸酶
圖1.Pannarase全能核酸酶酶切數(shù)據(jù)
 
Pannarase耐高鹽全能核酸酶
Pannarase在150 mM Na+濃度條件下酶活性最高,300 mM時(shí)仍有36.2%的活性
圖2.Pannarase耐高鹽全能核酸酶耐鹽曲線(xiàn)

圖3.Pannarase耐高鹽全能核酸酶酶切數(shù)據(jù)

Pannarase耐高鹽全能核酸酶(SAN),更高鹽耐受型
Pannarase耐高鹽全能核酸酶(SAN),更高鹽耐受型在600~700 mM Na+濃度條件下酶活性最高
 

圖4.Pannarase耐高鹽全能核酸酶(SAN),更高鹽耐受型耐鹽曲線(xiàn)
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