逐典小課堂-重組蛋白Q&A全解析第一彈來(lái)嘍！

一、重組蛋白概述

細(xì)胞因子重組蛋白是通過(guò)使用重組 DNA 或重組 RNA 的技術(shù)獲得的蛋白質(zhì)，在多個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。在醫(yī)學(xué)研究方面，重組蛋白為科研人員提供了強(qiáng)大的工具。例如，在細(xì)胞功能試驗(yàn)中，重組蛋白可用于研究細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和激活等過(guò)程。以細(xì)胞因子為例，白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子等重組蛋白能幫助科學(xué)家深入了解免疫細(xì)胞的作用機(jī)制以及在疾病發(fā)生發(fā)展中的角色。同時(shí)，重組蛋白在蛋白結(jié)構(gòu)研究中也不可或缺，通過(guò)對(duì)其結(jié)構(gòu)的分析，可以為藥物研發(fā)提供重要的基礎(chǔ)信息。

在生物制藥領(lǐng)域，重組蛋白更是占據(jù)著重要地位。許多治療疾病的藥物，如單克隆抗體、細(xì)胞因子、激素等都是通過(guò)重組技術(shù)生產(chǎn)的。比如，一個(gè)新的細(xì)胞因子重組蛋白在國(guó)際上被首次發(fā)現(xiàn)，可用于治療炎癥和肥胖。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該蛋白能夠明顯抑制急、慢性炎癥，抑制肥胖、脂肪肝形成，降低血糖并提高胰島素的敏感性。此外，重組蛋白還在診斷工具方面發(fā)揮著重要作用，可作為檢測(cè)疾病標(biāo)志物、病原體抗原或抗體的工具，有助于快速診斷和疾病監(jiān)測(cè)。

二、常見(jiàn)問(wèn)題解答

（一）凍干相關(guān)問(wèn)題

蛋白要凍干主要是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)熱敏感，凍干能使絕大部分蛋白質(zhì)的活性保留下來(lái)，提高蛋白的穩(wěn)定性并延長(zhǎng)保存時(shí)間，同時(shí)降低運(yùn)費(fèi)。凍干對(duì)蛋白的影響具有兩面性，一方面能保留大部分活性，但另一方面也可能造成蛋白的活性部分損失、聚集和其它變性問(wèn)題。在凍干前向蛋白溶液中加保護(hù)劑是為了在凍干和儲(chǔ)存過(guò)程中保護(hù)蛋白。常見(jiàn)的凍干保護(hù)劑有糖類、多元醇、聚合物、表面活性劑、某些蛋白和氨基酸等。例如，通常會(huì)添加 8%（質(zhì)量比體積）的海藻糖和甘露醇作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)改變以及凍干過(guò)程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集；甘露醇也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑，可以降低某些蛋白的凍干后聚集情況。

（二）重構(gòu)凍干粉

重構(gòu)凍干粉時(shí)，應(yīng)查看貨物隨附的分析證書(shū)以獲取有關(guān)重構(gòu)的確切說(shuō)明，因?yàn)椴⒎撬�有產(chǎn)品都在相同條件下重構(gòu)。一般來(lái)說(shuō)，建議使用無(wú)菌水進(jìn)行復(fù)溶。將推薦體積的無(wú)菌水加入小瓶中，輕輕搖晃以完全溶解蛋白質(zhì)，切記不要渦旋。

（三）看不見(jiàn)蛋白產(chǎn)品

管內(nèi)幾乎看不見(jiàn)蛋白產(chǎn)品的原因是蛋白產(chǎn)品中不含載體蛋白或其它添加物（如牛血清白蛋白、人血清白蛋白和蔗糖等），并以最低含鹽量的溶液進(jìn)行凍干時(shí)，常常不能形成白色網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，而是微量的蛋白在凍干過(guò)程中沉積在管內(nèi)，形成很薄或肉眼不可見(jiàn)的透明蛋白層。在打開(kāi)管蓋前，建議在小離心機(jī)中快速離心20 - 30秒，使附著在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底。

（四）種屬交叉活性

確定細(xì)胞因子的種屬交叉活性有以下方法：除少數(shù)例外，大多數(shù)人類細(xì)胞因子對(duì)小鼠細(xì)胞均有活性；許多小鼠細(xì)胞因子也可作用于人類細(xì)胞，但比活性可能低于對(duì)應(yīng)的人類細(xì)胞因子；IL - 7 等為數(shù)不多的人類細(xì)胞因子作用于小鼠細(xì)胞時(shí)比對(duì)應(yīng)的小鼠細(xì)胞因子活性更強(qiáng)；干擾素，GM - CSF，IL - 3 和 IL - 4 等細(xì)胞因子種屬特異，對(duì)非同源細(xì)胞幾乎沒(méi)有活性；相反，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素高度保守，在不同動(dòng)物種屬細(xì)胞上均具有很好的活性。

載體蛋白如 HSA 或 BSA 用于提高重組蛋白的穩(wěn)定性，并有助于避免產(chǎn)品粘在小瓶壁上。

（六）儲(chǔ)存方法

重組蛋白的儲(chǔ)存方式為，對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，蛋白質(zhì)溶液應(yīng)與載體蛋白（例如 0.1% BSA 或 0.1% HSA）分裝保存，并在- 20°C下冷凍保存。需要記住，每個(gè)冷凍 / 解凍循環(huán)都可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。除非分析證書(shū)上另有說(shuō)明，否則大多數(shù)重組蛋白的保質(zhì)期為一年。如果將它們保存在分析證書(shū)上所述的最佳存儲(chǔ)條件下，則提供此保證。

（七）確定蛋白數(shù)量

通過(guò) BCA、SDS - PAGE、HPLC 等方法確定重組蛋白數(shù)量。不同的測(cè)定產(chǎn)生不同的量化結(jié)果，有時(shí)如果進(jìn)行不同的檢測(cè)，差異可能會(huì)很大。蛋白質(zhì)也有可能在儲(chǔ)存過(guò)程中形成聚集體，在重組和離心后導(dǎo)致?lián)p失。對(duì)每批產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量控制測(cè)試，但是，同一批次中的一些小瓶可能與其他小瓶不同（這種情況很少發(fā)生）。

（八）區(qū)分蛋白類型

重組蛋白是利用基因工程技術(shù)產(chǎn)生的，通常是由轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的乳腺產(chǎn)生，其作為生物制藥在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中作用顯著。例如，將藥用蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，通過(guò)顯微注射等方法，導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的受精卵中，然后，將受精卵送入母體內(nèi)，使其生長(zhǎng)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)入泌乳期后，可以通過(guò)分泌的乳汁來(lái)生產(chǎn)所需要的蛋白質(zhì)藥品。融合蛋白又稱為 “標(biāo)簽蛋白”，常用的標(biāo)簽有 His、GST、Strep 標(biāo)簽。融合蛋白是通過(guò) DNA 重組技術(shù)將要表達(dá)的目的蛋白基因和表達(dá)載體上融合蛋白基因相連，表達(dá)出來(lái)的蛋白質(zhì)既含有目的基因蛋白又含有融合基因蛋白。天然蛋白質(zhì)是在自然界中存在的，不經(jīng)過(guò)人工的任何修飾或加工，比如大豆中的蛋白質(zhì)和病毒表面的蛋白質(zhì)。

上海逐典在擁有GMP級(jí)質(zhì)量管理體系平臺(tái)的基礎(chǔ)上，結(jié)合細(xì)胞治療藥物生產(chǎn)規(guī)范，提供細(xì)胞治療關(guān)鍵環(huán)節(jié)生產(chǎn)物料，提供全品類多種細(xì)胞因子，助力不同領(lǐng)域生物藥物的研究，加速臨床、上市申報(bào)進(jìn)程。

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細(xì)胞因子

產(chǎn)品特性

• 高生物活性
• 偏向性

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